遗传实验报告微核检测

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1、环境中诱变物质的微核检测摘要：微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是染色体发生畸变的另一神表现形式，微核发生率用来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。本实验以大蒜根尖作为实验材料，分别以清水和一定梯度的叠氮化钠溶液作为阴性对照和阳性对照，用一定梯度的咖啡溶液和电池浸出液对实验组大蒜根尖进行诱变。最后卡诺固定液进行固定、用改良苯酚品红染色、压片后观察统计各组的微核千分率，从而了解微核检测的方法和意义以及通过检测评价环境中常见物质的诱变情况。1.引言微核是间期细胞的细胞质屮一个或多个圆形

2、或杏仁状结构，是有丝分裂P期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。微核足染色体畸变的一种表现方式。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用丁分裂细胞而产生微核。n前研究表明，微核发生率同作川因了•的剂s呈正相关，微核发生率来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。微核试验足一种建立在细胞水〒上分析DNA损伤的技术。该技术以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验方法。目做许多国家和国际组织将艽规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毐理性安

3、全性评价的必做试验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多优点：①用鳞茎进行无性增殖，避免了有性生殖过程中的遗传性变异，具有遗传背贵稳定的优势；②分布广、材料易得，不受地区和季节的限制；③培养方便，操作简单，蒜瓣去皮r;将基部浸入净水屮即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数ri较多；④价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。近年來，由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出，日常生活中人类接触到的有潜在遗传莓性的

4、物质越来越多，其中一个较为突fii的就是废旧电池的污染。废旧电池屮的化学物质不断渗透在环境屮，K污染将持续若干年，直接或叫接的影响人们的身体健康，造成很人的危害。咖啡的主要成分为咖啡因。徳国生态学《okeo-test》的研究人员发现，他们所检测的所冇24种品牌的研磨咖啡和7个品牌的浓咖啡中都含冇致癌物质——丙烯酰胺。检测结果发现，丙烯酰胺也存在于煮熟的咖啡屮。绝人多数研究均表明咖啡与膀胱癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症有一定的关系。为了研究电池浸出液和电池咖啡是否真正具冇诱变致癌作用，木次实验通过

5、用咖啡和电池浸岀液进行大蒜诱变培养，在阴性和阳性对照设计下，计算其微核率，通过微核检测技术评价咖啡和电池浸出液的诱变情况。1.实验材料与方法2.1实验材料材料：大蒜器材:培养皿、单面刀片、双面刀片、Eppendorf管、油性记号笔、显微镜、载玻片、盖玻片、摄子；试剂：冰醋酸、无水乙醇、1MHC1溶液、100腿ol/LNaN3溶液、电池内部粉末、雀巢速溶咖啡粉末，改良苯酚品红。2.2实验方法2.2.1取材选取生长良好、人小相对一致的人蒜，剥成一瓣瓣V?置于放清水的培养皿屮。于24r水屮浸泡24-36

6、h,选择根长整齐一致，不定根长约0.5—lcm左右的大蒜随机分组。2.2.2处理各实验组将实验材料分为六组，放入8ml不M成分的培养液中，其中1组为阴性对照组，培养液为清水；2、3组为阳性对照组，培养液分别为25mmol/L、50mmol/LNaN3溶液；5——8组培养液分别为0.50g/ml浓度的咖啡和0.25g/ml浓度的咖啡以及分别添加2.5g和5.0g的电池内部粉末。将培养皿中置于20摄氏度左右室温下培养24h。表1实验组浓度梯度的设定阴性对照组阳性对照组实验组1组2组3组5组6组7组8组

7、淸水25mmol/LNaN350mmol/LNaN30.50g/ml咖啡0.25g/ml咖啡2.5g电池5.0g电池也讨以设定时间梯度，检测微核的形成情况。实验组如下（实验组采用的诱变剂是NaN。，既足实验组，乂是阳性对照组）表2实验组时间梯度的设定阴性对照（清水）实验组（NaN3）1组2组3组4组5组24h12h24h36h48h2.2.3恢复培养24小时。2.3.4固定卡诺固定液中固定24小时，如不立即检测nH多至70%乙醇中4°C下保存。2.3.5制片①②③根尖用1MHC1处理的lOmin,

8、水洗3次。切取近根尖分生区的伸长区组织，用改良苯酚品红染色10min。ikr,-：加上盖玻八^,用铅笔轻敲使细胞分散，AiP垂直压下去。2.3.6镜检每个根尖计数1000个细胞，统计含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微核千分率。2.3结果2.3.1实验结果图1含微核的细胞（10*40）图2含微核的细胞（10*40）图31组（10*40）图42组（10*40）图53组（10*40）图64组（10*40）图75组（10*40）图86组、7组（10*40）2.3.2实验结果分析与