遗传学微核报告

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1、YUNNANNORMALUNIVERSITY12级生科A班学期曰本科学生实验报告学号124120001姓名白荣艳学院_生命科学学院专业、班级_实验课程名称遗传学指导教师及职称吴瑕玉开课时间2013至2014学年下填报时间2014年04月26云南师范大学教务处编印实验名称：诱变物质的微核实验实验时间:2014—4—22小组合作：是一、实验预习1、实验目的1、了解微核发生的机制；2、掌握微核实验的一般程序和实践意义；3、掌握对实验动物进行药物处理的一般程序；4、掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力。2、实验设备及材料一.仪器和

2、器械生物显微镜、解剖剪、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、塑料吸瓶、吸水纸等。二.试剂及配制(1)小牛血清(灭活)将滤菌的小牛血清置于56°C恒温水浴保温30min灭活。灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室里。(2)姬姆萨(Giemsa)染液成分：Giemsa染料3.8g、甲醇375mL、甘油125mL。配制：将染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375mL和甘油，混合均匀，放置37°C恒温箱屮保温48h。保温期间，振摇数次，促使染料的充分溶解，取出过滤，两周后用。(3)O.lmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)成分:磷酸氢二钠(N

3、a2HPO4-12H2O)71.64g/L磷酸二氢钠(NaH2PO4•2H2PO4)31.21g/L分别加蒸馏水lOOOmL配成A、B液；取A液51ml，B液49ml混合，再加入100ml蒸馏水混匀，即为pH6.8的O.lmol/L磷酸缓冲液。(1)Giemsa应用液取2mlGiemsa染液与40mlO.lmol/L磷酸盐缓冲液混合而成。临用现配。3、实验原理及实验流程或装置示意图：微核(Micronucleus):染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成

4、一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓屮嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。实验动物小鼠是微核试验的常

5、规动物。体重为25g~35g。也可选用成年大鼠，体重为150g〜200g。剂量分组一般取受试物一般至少设3个剂量。每个剂量组5只动物。另外，还应设溶剂对照和阳性物对照组。常用环磷酰胺作为阳性物对照，剂量可为40mg/kg体重。染毒途径和方式染毒途径视实验目的而定，常用腹腔注射，24小时取材。4.实验方法步骤及注意事项(1)骨髓的制取①用断颈法处死小鼠。用剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦浄股骨上的肌肉。去股骨的髋面，将吸有0.85%Nacl生理等渗液小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓

6、细胞。反复吹打使其混合均匀，制成细胞悬液。②将细胞悬液在1000转/分离心5分钟，弃除上清液。(1)涂片在离心管中加入少量的小牛血清(约0.3ml)混匀后，按血常规涂片法涂片，长度约2cm〜3cm(涂片时一次涂成)。在空气中晾干。(2)固定将干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。即使当日不染色，也应固定后保存。(3)染色将固定过的涂片放入Giemsa应用液中，染色20min〜30min，然后立即用0.1mol/L磷酸盐缓冲液冲洗。(4)封片用滤纸及时擦干染片背面的水滴，再用双层滤纸轻轻按压染片，以吸附染片上残留的水分，再在空气中晃动数次

7、，以促其尽快晾干，然后放入二甲苯中透明5min，取出滴上适量光学树脂胶，盖上盖玻片，写好标签。观察与计数先用低倍镜，后用高倍镜粗略检查，选择细胞分布均匀，细胞无损，着色适当的区域，再在油浸镜下计数。虽然不计数含微核的有核细胞，但需用有核细胞形态染色完好做好判断制片优劣的标准。选择细胞完整、分散均匀，着色适当的区域，在油镜下观察。以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准。本法系观察嗜多染红细胞的微核。用Giemsa染色法，嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈粉红色。典型的微核多为单个的、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致,呈紫红色或蓝紫

8、色，直径通常为红细胞的1/20〜1/5。每只动物计数1000个嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，微核率以千分率表示。4.实验数据处理方法数据处理利用统计学软件SPSS的单因素方差分析或t检验等方法，进行数据处理