薄层扫描法测定蒙成药乌达巴拉

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1、薄层扫描法测定蒙成药乌达巴拉作者：王玉华赵国丁钟乃庚王伟【摘要】　　目的建立乌达巴拉-7中胆酸的定量分析方法。方法双波长薄层扫描法。结果线性范围为1.065～5.325μg，回归方程为Y=10073.664X-2，r=0.9991。在线性范围内，实验结果的精密度和重复性良好。平均回收率为99.1%,RSD为0.91%（n=5）。结论该方法简便、灵敏、准确，可用于乌达巴拉-7中胆酸的含量测定。【关键词】乌达巴拉-7胆酸薄层扫描法　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofcholicacidsinethodsDo

2、ubleethodployed.ResultsThelinearrangeethodethodissimple,sensitiveandaccurate,inethecontentofcholicacidsinCNa：硅胶G（3∶1）湿法铺板，厚度为0．5mm，晾干，于110℃活化1h备用。　　2.1.2展开剂异辛烷－醋酸乙酯-冰醋酸-甲酸（8∶4∶2∶1）。　　2.1.3显色剂喷10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热显色。　　2.1.4扫描方式反射法锯齿扫描，SX=3，狭缝1.2mm×1.2mm。　　2.1.5测定波长与参比波长的选择将显色后的斑点在400～700nm范围内作光

3、谱扫描，见图1。由图1确定胆酸斑点的测定波长和参比波长分别为：λs=470nm，λR=650nm。　　图1胆酸斑点的光谱扫描图（略）　　2.2提取条件的选择胆酸易溶于甲醇中，故选择甲醇做为提取溶剂。进一步将样品进行了如下的净化处理：将甲醇提取液过滤，精密吸取续滤液一定体积，蒸干，用碱回流提取，将碱回流提取液酸化，用醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解定容。　　2.3溶液的制备　　2.3.1胆酸对照品溶液的制备取胆酸对照品约5mg，精密称定置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含胆酸1mg）。　　2.3.2供试品溶液的制备取本品细粉约0.4g，精密称定，

4、置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称重，超声处理30min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%NaOH溶液10ml，加热回流2h，冷却，加稀盐酸19ml调节PH至酸性，用醋酸乙酯提取4次(25，25，20，20ml),每次醋酸乙酯液均通过同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过,合并提取液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。　　2.4线性关系考察用定量毛细管吸取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0μl胆酸对照品溶液（浓度为1mg/ml）点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开

5、，定位，扫描，以斑点面积积分值对点样量（μg）之间做回归分析，用最小二乘法求得回归方程为Y=10073.664X-2，r=0.9991（Y为吸收度积分值，X为标准品的量：μg）。线性范围：1.065～5.325μg。标准曲线见表1和图2。　　表1标准曲线测定的数据表（略）　　图2胆酸测定的标准曲线（略）　　2.5精密度实验　　2.5.1同板精密度实验在硅胶G薄层板上点供试品溶液3μl，点5个点，按上述条件展开，显色，分别测定各斑点的积分值。结果见表2。　　2.5.2异板精密度实验取5张硅胶G薄层板，分别点供试品溶液3μl，按上述条件展开，显色，分别测定各板上斑点的积分值。实验结

6、果见表3。　　表2同板精密度实验结果（略）　　表3异板精密度实验结果（略）　　结果表明，方法的精密度良好。　　2.6稳定性实验将以上精密度实验的斑点分别于0，2，4，6，8h进行扫描测定。结果见表4。结果表明，在6h内的积分值基本稳定。　　表4稳定性实验结果（略）　　2.7重复性实验取同一批号（20041112）乌达巴拉-7供试品5份，每份取样量约0.4g，精密称定，分别按“溶液的制备”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液。吸取供试品溶液3μl，对照品溶液1μl和3μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷醋酸乙酯冰醋酸甲酸（8∶4∶2∶1）为展开剂，取出，晾干，喷10

7、%的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰。照薄层扫描法［2］进行扫描，波长为λs=470nm，λR=650nm。测量供试品与标准品的吸收度积分值，计算，即得。结果见表5。　　表5重复性实验结果（略）　　2.8加样回收实验取已知胆酸含量的乌达巴拉-7（批号为20041112）6份，每份约0.2g，精密称定，分别精密加入胆酸对照品适量，按质量标准“2.7”项下方法操作并测定每份的含量，计算回收率，结果平均回收率为99.08%，RSD为0.909%。结果见表6。　　表6加样回收实验结果（略）　　2