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《illumina基因测序仪中文测序原理.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、SequencingTechnology张军磊13655172180南京才泰生物科技有限公司©2010Illumina,Inc.Allrightsreserved.Illumina,illuminaDx,Solexa,MakingSenseOutofLife,Oligator,Sentrix,GoldenGate,GoldenGateIndexing,DASL,BeadArray,ArrayofArrays,Infinium,BeadXpress,VeraCode,IntelliHyb,iSelect,CSPro,GenomeStudio
2、,GeneticEnergy,HiSeq,andHiScanareregisteredtrademarksortrademarksofIllumina,Inc.Allotherbrandsandnamescontainedhereinarethepropertyoftheirrespectiveowners.测序流程1文库制备(~6hrs)片段化的DNA末端修饰/添加一个A两端加接头选择加上接头的DNA扩增达到合适上样量杂交到flowcell表面2自动簇生成(~5hrs)延伸oligo接头1-8个样品完成桥式扩在模板序列链上加测序引物3测
3、序(~36hrsfor36循环)1-8样品对模板序列链执行测序COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY2文库制备流程纯化基因组DNA使DNA片段化片段<800bpDNA片段末端修饰通过填充和核酸外切酶作用使末端补平末端补平，在5’加上一个磷酸基团磷酸化作用加上一个“A”到3’端添加一个A碱基3’–小突出在末端加上接头连上接头加上接头的DNA片段片段大小选择300–600bp片段PCR扩增扩增带接头的DNA文库质控COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY基因组DNA文库制备完成3测
4、序流程1Libraryprep(~6hrs)DNA片段末端修饰/添加一个ADNA片段两端加接头选择加上接头的DNA片度2AutomatedClusterGeneration(~5hrs)杂交到flowcell表面1-8个样品延伸杂交的oligo短序列进行桥式扩增3Sequencing(~46hrsfor36cycles)1-8个样品对forwardstrand执行测序COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY4流动槽（Flowcell）8个通道简易流程中的关键点Flowcell表面结纯净的簇是在一个独立的合一层
5、oligo接头。环境中生成的（需要一个洁净的室）测序步骤也在flowcell的簇上进行COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY6簇生成:DNA片段杂交&延伸接头序列>50M的单分子DNA片段杂交到flowcell表面的oligo引物上。单分子DNA片段杂交在flowcell表面后，oligo引物就会在聚合酶作用下延伸。Oligo引物3’延伸COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY7簇生成:变性双链DNA双链分子变性分开。新合成链原始链模板链被洗掉。新合成链以共价键的形式紧紧连接在
6、flow洗掉cell表面。COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY8簇生成:在flowcell上形成共价结合的单链DNA片段单链被以共价键的形式结合随机到flowcell上的模式。COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY9簇生成:桥式扩增单链弯曲杂交在相邻的oligo引物上形成一个桥式结构。杂交引物在聚合酶作用下延伸。COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY10簇生成:桥式扩增形成双链的桥式结构.COMPANYCONFIDENTIAL–INTERN
7、ALUSEONLY11簇生成:桥式扩增双链的桥式结构变性打开Result:形成2个copy的以共价键结合在flowcell的单链模板。COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY12簇生成:桥式扩增单链弯曲杂交在相邻的oligo引物上形成一个桥式结构。杂交oligo引物在聚合酶作用下延伸。COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY13簇生成:桥式扩增桥式扩增一直循环重复，直至形成5000-10000copiesCOMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY14簇
8、生成双链DNA桥变性分开。Reversestrands被剪切然后洗掉。COMPANYCONFIDENTIAL–INTERNALUSEONLY15簇生成…仅仅留下由forwardstrands组
