精氨酸加压素及其受体对大鼠心肌成纤维细胞inos

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1、精氨酸加压素及其受体对大鼠心肌成纤维细胞iNOS【关键词】精氨　　InfluencesofargininevasopressinanditsreceptorsoniNOSNOsystemactivityincardiacfibroblasts　　【Abstract】AIM:Toexploretheinfluencesofargininevasopressin(AVP)anditsreceptorsoninduciblenitricoxidesynthasenitricoxide(iNOSNO)systemactivityincardiacfibroblasts(CFs).METHODS:Af

2、terCFsethod,spectrophotometryandRTPCRactivityinducedbyAVPanditsreceptors.RESULTS:AVPsignificantlyenhancedCFsiNOSNOsystemactivity.V1receptorantagonistinhibitediNOSNOsystemactivityinaconcentrationdependentmannerand1×10-7mol/LV1receptorantagonistdecreasediNOSNOsystemactivitytothecontrollevel.V1recepto

3、rantagonistandV1+V2receptorantagonisthadthesameeffectsoniNOSNOsystemactivity.CONCLUSION:V1receptorantagonistmediatediNOSNOsystemactivityincreasesinAVPinducedCFs.V1receptorantagonistmaybeaneodeling.　　【Keyol/LV1受体拮抗剂可将AVP诱导下CFs的iNOSNO系统活性抑制到基础状态水平.V1+V2受体拮抗剂具有与V1受体拮抗剂相似的作用.结论：AVP干预下CFsiNOSNO系统活性增强由V1

4、受体介导，V1受体可望成为阻断或逆转心脏重构的新靶点.　　【关键词】心肌成纤维细胞；精氨酸加压素；精氨酸加压素受体；一氧化氮　　0引言　　心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)过度增殖和胶原合成分泌过多是心脏重构的重要病理基础，一氧化氮(NO)可通过抑制CFs过度增殖和胶原合成分泌过多抑制心脏重构〔1-2〕.精氨酸加压素(argininevasopressin,AVP)能够诱导CFs诱导型一氧化氮合酶一氧化氮(iNOSNO)系统活性增加〔3〕，NO合成增多.但AVP如何将这种细胞外信息传递至细胞内，目前尚不清楚.心肌组织有AVP受体表达，AVP受体分为V1和V2两种类

5、型〔4〕.AVP干预下CFsiNOSNO系统活性增加由哪一种受体介导尚少见报道.我们用AVP受体拮抗剂干预AVP诱导下的CFs，观察其对CFsiNOSNO系统活性的影响，以了解AVP诱导CFsiNOSNO系统活性增加的信息传递途径，为防治心脏重构提供新的思路.　　1材料和方法　　1.1材料　　实验用SD仔鼠(出生1~3d,第四军医大学动物中心)；AVP(美国PeninsularLab)；V1受体拮抗剂、V1+V2受体拮抗剂(Sigma公司)；NO含量和NOS活性测定试剂盒(南京建成生物技术研究所)；TRIZOL裂解液、Oligo(dT)，MMLV反转录酶(Promega公司)；TaqDNA聚

6、合酶(宝生物公司)；PCR引物由上海生物工程公司合成.　　1.2方法　　1.2.1CFs的分离、培养和鉴定无菌条件下取SD仔鼠心室，盐水漂洗后剪至2~3mm3小块.1.25g/L胰蛋白酶37℃消化20~40min，收集细胞，筛网过滤，1000r/min离心.将所得细胞沉淀物悬浮于含100mL/L小牛血清的DMEM培养液中，吹打分散后置于37℃，50mL/LCO2孵箱中贴壁60~90min，差速贴壁法去除心肌细胞.培养细胞长至近融合状态时传代.实验用2~3代细胞.对CFs进行SABC法免疫组织化学染色：纤维连接蛋白染色阳性，血管平滑肌肌动蛋白染色阴性，符合CFs染色特征.　　1.2.2实验分组

7、实验分为对照组、AVP组(1×10-7mol/L)，AVP+V1受体拮抗剂组(1×10-9，1×10-8，1×10-7mol/L)和AVP+V1+V2受体拮抗剂组(1×10-7mol/L).CFs培养至近融合状态时无血清培养液驯化24h，继之分组培养24h收集培养液测定NO含量和NOS活性，收集细胞测定iNOSmRNA表达量.每组试验重复3次.　　1.2.3NO含量测定利用硝酸还原酶将NO3-还原为NO2-，