西归中多糖的提取及含量测定

《西归中多糖的提取及含量测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、西归中多糖的提取及含量测定【摘要】　　目的研究西归多糖的提取工艺并测定多糖的含量。方法通过正交实验确定最佳提取工艺，苯酚-硫酸法测定西归总多糖含量。结果最佳提取工艺为提取次数3次，固液比1∶10，提取时间1h，提取温度90℃。西归总多糖含量为32.71%。结论该提取工艺合理，测定方法准确。【关键词】西归；多糖；苯酚-硫酸法　　西归是伞形科属植物西藏凹乳芹VicatiathibeticadeBoiss.的干燥根［1］，主要分布于云南西北部、四川西部及西藏等地。西归在云南大理有悠久的栽培历史，在大理等地常作为滋补蔬菜炖肉、炖鸡等食用，鲜品也可生吃,风味独特［2］。西归含有较

2、多的糖醇和糖［3］。多糖(polysaccharide)是构成生命的四大基本物质之一，多糖在增强免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面发挥着生物活性作用。因此对多糖的研究与开发已越来越引起人们的广泛关注［4］。有关西归中多糖的研究尚未见文献报道。本文对西归中多糖的提取工艺和含量进行了研究，为合理开发、综合利用西归资源提供了切实可行的工艺路线。　　1仪器与材料　　1.1仪器SY-21型电热恒温水浴箱（北京泰克仪器有限公司），TU-1800SPS紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），FA1004-53423电子天平（上海天平仪器厂），离心机，真

3、空冷冻干燥机等。　　1.2药材与试剂　　葡萄糖、乙醇、苯酚、硫酸、氯仿、正丁醇均为AR级。西归购自云南省大理州鹤庆县马厂乡，经本院生药教研室周浓老师鉴定为西藏凹乳芹VicatiathibeticadeBoiss.的干燥根。　　2方法与结果　　2.1多糖的提取及换算因子测定　　2.1.1西归多糖的提取与精制　　称取西归粗粉50g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提取，布氏漏斗过滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约80ml时，用Savage法除蛋白，即是向浓缩液中加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇，强烈振摇30min，以3000r/min离心15min，除去交

4、界处变性蛋白，水层仍按照此方法反复除蛋白，直至氯仿层与正丁醇层之间无白色沉淀。然后在上清液中加入一定量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定比例，静置过夜。沉淀用布氏漏斗抽滤，滤渣以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多次，沉淀放入真空冷冻干燥机内，冷冻干燥48h，得灰白色粉末状的粗多糖。　　2.1.2多糖换算因子测定取粗多糖20mg，精密称定，分别加水溶解并定容至100ml，精密量取1.0ml，按标准曲线绘制方法操作，利用标准曲线计算单糖浓度，按公式f=g)，C为溶液中单糖的浓度(mg/ml)，D为稀释倍数］。测得西归多糖的f＝0.9863（RSD=1.84%，n=6)。　　2.2样

5、品多糖的测定取干燥样品粉末1g，精密称定，至圆底烧瓶中，精密加蒸馏水10ml，90℃回流提取3次，1h/次，滤过，滤液定容至100ml，精密量取续滤液1.0ml，按标准曲线绘制方法操作，测定其吸光度，按公式计算：多糖含量（%）=C×D×fg/ml)，D为样品溶液的稀释倍数，l量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，避光保存，即得浓度为5%的苯酚试剂。　　测定波长的选择：用一定浓度的葡萄糖标准溶液和供试品溶液各1.0ml置具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml，摇匀，另以1.0ml蒸馏水作为空白液同上操作，沸水浴中恒温15min，取出，冰

6、水浴冷却至室温，在波长200～800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在487nm波长处均有最大吸收，故选用487nm为检测波长。　　2.4正交实验根据有关资料报道，提取次数(A)，固液比(B)，提取时间(C)，提取温度(D)4个因素，每个因素3个水平，选用L9(34)正交实验方案提取西归多糖，以多糖含量为指标确定最佳提取工艺。因素水平见表1，正交实验结果见表2。表1西归多糖提取实验因素水平，表2L9(34)正交实验结果（略）。　　由正交实验数据可以得知，各因素对西归总黄酮含量的影响程度不同，其影响大小依次为：D(提取温度)>B（固液比）>A（提取次数）&

7、gt;C（提取时间）。其最佳提取条件为：A3B1C2D2，即提取次数3次，固液比1∶10，提取时间1h，提取温度90℃时，提取效果最好。　　2.5最佳提取工艺验证　　在上述最佳条件下进行3次重复实验。结果见表3。表3最佳条件验证实验（略）　　　　从表3可看出，最佳提取工艺条件具有较好重复性，说明该最佳工艺条件是合理、可靠的。　　2.6.2稳定性实验　　取同一份供试品溶液，按“2.6.1”项下方法分别显色，于0，10，30，60，90，120min时测定吸光度。测定吸光度在120min内RSD=0.43%，表明供试品溶液在120min内吸光