如何避免elisa法测hbsag弱阳性漏检

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1、如何避免ELISA法测HBSAg弱阳性漏检　　【】本方法对乙肝表面抗原检测结果处于灰带区（高值阴性），酶标仪判读吸光度CD值0.095～0.11之间20例结果进行分析。其中50%为乙肝表面抗原阳性及弱阳性。15%三个月后复检转为阳性。35%为乙肝表面抗原阴性。因此，认为ELISA方法应严格操作，防止阳性漏检。【关键词】乙肝表面抗原，弱阳性结果，防止漏检【】R392.11【】A【】1007-8517（2013）10-0125-01在用ELISA方法检测乙肝表面抗原（HBSAg）时，发现有些检测结果处于灰带区。目测判定为阴性，若用酶标仪判读，测定值等于或接近

2、Cut-off值，为探讨高值阴性的确切意义，本室观察了测定值在0.095～0.11标本20例，对其结果进行了分析。1、材料和方法1.1标本检测门诊及住院患者HBsAg，记录其检测结果，收集测定值在0.095～0.11之间标本20例。1.2试剂上海科华有限公司HBsAg试剂盒。1.3方法ELISA法。2、结果测定结果见下表20例中有10例经反复检测，HBsAg测定值>Cut-off值（0.105）为阳性。7例转为低值阴性，仍有3例介于Cut-off附近。经跟踪复检测定值>Cut-off值转为阳性。3、讨论笔者认为，人体感染HBV后，HBsAg为

3、较先出现的病毒标志物，从感染到血中出现HBsAg间隔时间与感染的途径和数量有关，一般在感染后29～43天或18～84天出现，如数量大则间隔时间短，约2～3周。如数量小则间隔时间长，可达3～4个月，甚至半年。因此，HBsAg在感染后达到可检出水平，有一个高值阴性、弱阳性、强阳性的过程，高值阴性，者中包含一部分阳性结果，应反复检测，有条件应跟踪复检连续观察半年。ELISA方法测HBsAg的滴度（浓度）高低与肝炎病情轻重成反比。经临床观察，在急性肝炎中暴发性肝炎滴度最低，慢性肝炎中慢性活动性肝炎滴度最低，肝脏损坏与机体对抗原的免疫反应，而不是感染病毒的数量。一

4、般讲免疫反应低，则肝细胞损伤轻，HBsAg呈高滴度，反之则呈低滴度。因此，HBsAg可以时高时低，时阴时阳。在此时，弱阳性标本检测显得尤为重要，高值阴性也应引起高度重视。初检时，高值阴性者中很有可能是一些临床症状较重的暴发性及活动性肝炎患者。此种情况单项HB-sAg很难判定，应结合HBsAg、HBeAg、HBeAg、HBcAg-IgM综合判定，如果其它几项呈阳性，对此时灰色区域的HBsAg应慎重报告。ELISA方法测HBsAg影响因素很多，应用国产试剂盒ELISA阳性漏检率为3%，其中窗口期占90%，血液中浓度纸、HBV株的变异、非典型血清转阳和人为差错

5、共占10%。在实际工作中如何排除ELISA影响因素，提高检测的灵敏度。我们认为，影响测定，首先考虑到的就是浓度漏检HOOK现象，以前用国产试剂盒检测HBsAg多为一步法，即将待测物与酶标记物同时加入包被好的反应孔中，温育、洗涤、显色。而现在两步法是先将待测物加入包被好的反应孔内，经温育、抗体牢固结合。洗涤掉游离的抗原、抗体和非特异性蛋白等污物。再加酶标记物温育，形成夹心复合物洗涤，显色。而现在两步法检测中高浓度的HBsAg只与包被的固相抗-HBs饱和性结合，形成抗原抗体复合物，多余的未结合的游离HBsAg第一次洗涤时被洗掉，随后加入酶标物就能形成双抗体夹

6、心复合物加底物显色试验中发现一步法检测HBsAg阴性的血术经两步法检测HBsAg确有阳性。采取两步法可以削弱HOOK现象降低HBsAg的阳性漏检率。另外，对ELISA判断在灰色区域范围的人群除行综合试验确诊是否HBsAg阳性也可建议进行FQ-PCR以判断是否为乙肝患者。因为我们知道HBV中的Dane颗粒仅占0.2%，而小球型颗粒及管型颗粒占98%以上，其仅表达HBsAg而不含DNA，所以，对于ELISA检出HBsAg阳性并不表明HBV、DNA阳性，因FQ-PCR对实验室条件要求较高，现在基层医院尚未普及。基层各中小医院还在普遍应用ELISA方法。ELIS

7、A方法虽有灵敏度高、特异性强等优点，但它对操作要求较高。我们要想避免操作中的人为技术差错，必须按ELISA操作规程标准操作。笔者认为ELISA方法则HBsAg必须每板随测定值1ng/ml临界值质控品。它是做为试剂盒中第三个对照品，可以灵敏反应出试剂盒的检出水平，确保弱阳性标本不漏检，同时也是反应结束的判定标准。只要从试剂平衡、回样、保温、漂浮、洗涤、显色等每一步骤都严格控制，其结果重复性很好。当然，高值阴性中也有相当比例的阴性结果，多为操作中洗板不净等因素所致。更多特种医学论文请参考tezhongyixue/