hplc法测定不同产地灯盏细辛中灯盏乙素的含量

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1、HPLC法测定不同产地灯盏细辛中灯盏乙素的含量刘鹏，周军，秦向阳，王巧峰，李晓晔【关键词】,灯盏乙素DeterminationofscutellarininErigeronbreviscapusfromdifferentplacesbyHPLC　　【Abstract】AIM:TodevelopaHPLCmethodtodeterminatetheproportionofscutellarininErigeronbreviscapusfromdifferentplacesofproduction.METHODS:Theanalyticalcolumnm×150mm）filledstat

2、ionaryphase.Themobilephaseconsistedofmethanol(0.02mol/L)phosphatebuffersolution〔pH5.2(35∶65)〕.ThefloL/min.Theinjectionvolume.Thecolumntemperatureethodethodethodisconvenient,economicalandaccuratem×150mm，5μm)为色谱柱，流动相为甲醇-0.02mol/L，磷酸缓冲液pH为5.2（35∶65），检测波长为335nm，流速0.8mL/min，柱温25℃，以外标法测定灯盏细辛中灯盏乙素含量.结

3、果：灯盏乙素在0.74~3.70μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9996，灯盏乙素平均加样回收率为97.24％，RSD为0.82％（n=6）.结论：本方法可靠性高，准确性和重现性好，适用于灯盏细辛中灯盏乙素的含量测定.　　【关键词】灯盏乙素；高效液相色谱法；灯盏细辛　　0引言　　灯盏细辛为菊科植物短葶飞蓬〔Erigeronbreviscapus(Vant.)Hard.Mazz〕的干燥全草.主要分布于我国云南、贵州、广西、四川等地，是一种民间常用中药.该药具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络等功效.临床主要用于治疗缺血性脑血管疾病、冠心病、心绞痛等症，其疗效较好，毒副作

4、用小，运用范围广〔1〕.灯盏细辛主要有效成分为黄酮类化合物灯盏乙素〔2-3〕，由于不同产地的灯盏花药材主成分含量差异较大，为了控制药材质量，本研究　　1.2.3线性关系考察精密吸取灯盏乙素对照品溶液(370mg/L)0.5，1，1.5，2，2.5mL分别置于5mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，分别吸取各对照品溶液20μL进样，按上述色谱条件测定峰面积.　　1.2.4稳定性试验取灯盏乙素对照品溶液，分别在0，1，5，10，24和48h依次进样20μL，测定灯盏乙素含量.　　1.2.5精密度试验精密吸取370mg/L灯盏乙素对照品溶液20μL，重复进样6次

5、，测定峰面积，计算精密度.　　1.2.6重现性试验取1号灯盏细辛样品6份，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定含量.　　1.2.7加样回收率试验精密称量6份已知含量（1号样品，灯盏乙素含量为7.13mg/g）的灯盏细辛样品70mg，分别准确加入灯盏乙素对照品(370，740，1110mg/L)1mL，按样品测定法，测定灯盏乙素含量，计算加样回收率.　　2结果　　2.1线性关系线性关系的考察中测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=-27.34＋3876.04X，r=0.9996(n=6).结果表明灯盏乙素在0.74~3

6、.70μg范围里呈良好线性关系.　　2.2灯盏乙素稳定性稳定性试验中，6次所测灯盏乙素峰面积RSD为1.03％，灯盏乙素在流动相溶液中48h内稳定.精密度试验中，6次测量峰面积的精密度RSD为0.98％.重现性试验中，测得灯盏乙素的RSD为0.94％（n=6），表明此法重现性良好.加样回收率试验中，测定的平均加样回收率为97.24％，RSD为0.82％（n=6）（表1）.　　2.3样品测定结果对不同产地灯盏细辛样品进行测定，分别精密吸取对照品与各供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，依外标法计算含量，测得样品中灯盏乙素的含量.四批样品结果见表2.灯盏细辛生药样品色谱

7、图见图1.　　表1加样回收率试验结果（略）　　表2样品测定结果（略）　　A:灯盏乙素对照品;B:灯盏细辛生药样品.　　图1灯盏乙素对照品与灯盏细辛生药样品色谱图（略）　　3讨论　　3.1流动相选择文献〔4,5〕采用磷酸盐缓冲液、甲醇水磷酸为流动相，其问题是灯盏乙素主峰与其他峰分离度不好，达不到有效分离.我们改进流动性配比，选择甲醇0.02mol/L磷酸缓冲液（pH为5.2）（35∶65）为流动相，此流动相能排除干扰，适宜灯盏乙素主峰与其他峰明显分离.　　3