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时间:2018-11-13
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1、HPLC法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量余晓晖,赵磊,吴福祥,刘本亮摘要:目的:建立黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定盐酸小檗碱的含量。结果:盐酸小檗碱在0.05~0.5μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9998,平均加样回收率为96.9%,RSD=1.43%(n=5)。结论:本法操作简便,结果准确、可靠,可用于黄柏胶囊的质量控制。 关键词:高效液相色谱法;黄柏胶囊;盐酸小檗碱 黄柏胶囊是由黄柏制成的单味中药制剂,具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等功效,临床上主要用于湿热泻痢、黄疸、带下、热淋等,收载于《卫生部药品
2、标准》(中药成方制剂,第五册)。主药黄柏中的盐酸小檗碱为其抗菌成分之一〔1〕,其质量标准中仅有黄柏的定性鉴别,为有效控制该药品质量,本文采用RP-HPLC法测定了主药黄柏中的盐酸小檗碱的含量,该方法简便、准确、重现性好,结果较满意。 1仪器与试药 SP8810高效液相色谱仪、SP200检测器、SP4600数据处理仪(美国光谱物理公司)、盐酸小檗碱(中国药品生物制品鉴定所)、乙腈(色谱纯试剂)、重蒸水,其他试剂均为分析纯。样品为市售品(批号:20020316、20010806、20010908)。 2方法与结果〔2-4〕 2.1色谱条件 C18反相柱(
3、10μm,4.6mm×250mm,中国科学院大连化学物理所提供);流动相:0.05moL/L;磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(76∶24)(用磷酸调解pH值至3.5);紫外检测波长:270nm;流速:0.8mL/min;柱温:室温;理论板数(n)按盐酸小檗碱计不低于3000。在此条件下,样品中盐酸小檗碱与其他相关峰均能达到基线分离,盐酸小檗碱色谱峰的保留时间为3.77min,有关色谱图见下图。黄柏胶囊的HPLC图图1盐酸小檗碱对照品色谱图图2样品色谱图注:A盐酸小檗碱色谱峰 2.2线性关系考察 精密称取盐酸小檗碱4.580mg,加适量稀乙醇制成0.5mg/mL的溶
4、液,取适量微孔滤膜过滤后,精密吸取1mL,置10mL容量瓶中,用稀乙醇稀释至刻度、摇匀,精密吸取1μL、3μL、5μL、7μL、10μL,测定峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标,进样量(μg)为横坐标进行回归,求得回归方程为Y=3592061X-30718.94,r=0.9998,表明盐酸小檗碱在0.05~0.5μg范围内线性关系良好。 2.3精密度试验 精密吸取同一对照品溶液(50μg/mL)5μL,连续进样5次,盐酸小檗碱峰面积的RSD=1.03%。 2.4重现性试验 精密称取同一样品5份,按样品制备方法制备,各吸取10μL进样、测定,盐酸小檗碱
5、含量的RSD=2.25%。 2.5稳定性试验 精密吸取同一样品溶液10μL,每隔2h测定一次,共测6次,盐酸小檗碱峰面积的RSD=2.51%(n=6)。 2.6回收率试验 取已知含量的样品适量,分别精密加入盐酸小檗碱对照溶液(0.5mg/mL)适量,按样品测定方法制备和测定,计算回收率,结果见表1。表1盐酸小檗碱回收率测定结果取样品溶液适量研细,精密称取样品0.5121g,置索氏提取器中,加(1→100)盐酸甲醇100mL,加热回流提取至无色,放冷至室温,滤过,滤液回收甲醇至5mL,用稀乙醇定容到100mL容量瓶中,摇匀,微孔滤膜滤过,精密吸取续滤液1
6、mL置10mL容量瓶中,稀乙醇稀释至刻度,精密吸取该溶液10μL和2.2项下的对照品溶液5μL、7μL,按上述色谱条件测定,用外标两点法计算盐酸小檗碱的含量,结果见表2。表2含量测定结果 3讨论 测定盐酸小檗碱含量的方法较多,有高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法等。本文采用HPLC方法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱含量,方法简便、快速、结果可靠,可作为该制剂定量控制指标。
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