慢性应激老年抑郁大鼠海马ca3区c

《慢性应激老年抑郁大鼠海马ca3区c》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、慢性应激老年抑郁大鼠海马CA3区c作者：张红卫　侯安继　胡艳　周维　唐志佼【摘要】　　目的探讨慢性应激老年抑郁大鼠海马CA3区c-fos和caspase-3蛋白的表达，以探讨老年抑郁症的发病机制。方法将20只ethods20geratic2145轮转式切片机。1.5主要试剂兔抗大鼠c-fos多克隆抗体（美国SantaCruz公司提供）；兔抗大鼠caspase-3多克隆抗体（武汉博士德公司提供）；SP试剂盒（美国ZYMED公司产品，北京中山生物技术有限公司分装）。1.6动物处理于实验结束后1天，再次进行开场行为测定并称重，然后用戊巴比妥快速麻醉动物，开胸，经左心室快速灌注37℃

2、生理盐水约200ml,再灌注中性甲醛200～300ml，断头，取脑组织修块，置于10%中性福尔马林溶液中固定。1.7常规石蜡切片(厚4～5μm)HE染色染色结果：普通光镜下可见，细胞核呈蓝色，细胞质呈淡红色。x【摘要】　　目的探讨慢性应激老年抑郁大鼠海马CA3区c-fos和caspase-3蛋白的表达，以探讨老年抑郁症的发病机制。方法将20只ethods20geratic2145轮转式切片机。1.5主要试剂兔抗大鼠c-fos多克隆抗体（美国SantaCruz公司提供）；兔抗大鼠caspase-3多克隆抗体（武汉博士德公司提供）；SP试剂盒（美国ZYMED公司产品，北京中山生物

3、技术有限公司分装）。1.6动物处理于实验结束后1天，再次进行开场行为测定并称重，然后用戊巴比妥快速麻醉动物，开胸，经左心室快速灌注37℃生理盐水约200ml,再灌注中性甲醛200～300ml，断头，取脑组织修块，置于10%中性福尔马林溶液中固定。1.7常规石蜡切片(厚4～5μm)HE染色染色结果：普通光镜下可见，细胞核呈蓝色，细胞质呈淡红色。1.8免疫组化染色［5］切片脱蜡入水，蒸馏水洗2次×3min；用0.01MpH6.0柠檬酸缓冲液抗原修复，微波处理，解冻档5～6min；滴加3％H2O2,37℃，10min；滴加血清封闭，37℃，15min；滴加一抗（一抗稀释度为c-fo

4、s1：100,caspase-31:50），37℃，2h；PBS洗3次×3min；滴加生物素化的羊抗兔IgG，37℃，20min；PBS洗3次×3min；滴加标有辣根过氧化物酶的链酶亲和素，37℃，20min；PBS洗3次×3min；DAB显色；苏木素复染核；中性树胶封片。同时用已知的阳性切片做阳性对照,以PBS取代一抗做阴性空白对照。光镜下观察，c-fos阳性表达神经元为胞核呈棕黄色，核仁不着色；caspase-3阳性表达神经元为胞浆和胞膜呈棕黄色。1.9图像分析采用图像分析仪，每张切片选取海马CA3区四周及中央区域，200倍镜下测定其c-fos和caspase-3蛋白的阳

5、性细胞数，平均灰度值等指标，各取平均值作为这张切片的值。由同一人用同一台仪器测定。1.10统计学处理采用SPSS14.0统计软件包进行分析，结果以均数±标准差表示，组间检验采用t检验。2结果2.1体重和开场行为评定见表1。从表1可以看出,实验组与对照组实验前开场行为和体重差异无显著性(P>0.05),实验组实验前和实验后开场行为中,除粪便粒数外,各指标差异有显著或非常显著性(P<0.05或P<0.01),体重也较实验前减轻(P<0.05);对照组实验前后开场行为也有部分改变(P<0.05或P<0.01),体重较实验前增加(P<0.01

6、);实验组与对照组于实验后比较,除修饰次数差异无显著性,其余各指标对照组都优于实验组(P<0.05或P<0.01)。2.2c-fos和caspase-3蛋白的图像分析结果见表2。从表2可见，c-fos蛋白的图像分析结果中，平均灰度值两组比较差异有非常显著性（P=0.000），两组阳性单位数比较，P=0.000,说明实验组与对照组在c-fos的表达上存在明显的差异。caspase-3的图像分析结果中，平均灰度值和阳性细胞数实验组与对照组差异均有极显著性（P=0.000）,说明慢性应激老年大鼠c-fos、caspase-3蛋白表达较正常对照组有显著增强。表2c-fos

7、和caspase-3蛋白的图像分析结果注:与对照组比较,P=0.000。2.3c-fos、caspase-3蛋白免疫组化染色见图1～8。图1～4为实验组和对照组c-fos蛋白免疫组化光镜照片，以胞核内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞，结果可见，在相同观察条件下，实验组阳性细胞数较对照组显著增多，提示慢性应激状态下老年大鼠c-fos蛋白表达较正常组有明显增强。图5～8为实验组和对照组caspase-3免疫组化光镜照片，以胞浆内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞，在相同观察条件下，可见实验组阳性细胞数较对照组显著增多，同