酶联免疫法与胶体金法结合判断hbsag准确性的探

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1、酶联免疫法与胶体金法结合判断HBsAg准确性的探【关键词】酶免疫测定胶体金肝炎表面抗原乙型现在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测已经非常普遍，但由于受检测方法的限制和乙肝感染的病程及标本的采集、操作等因素的影响，经常出现HBsAg检测的假阳性和假阴性现象［1］。目前HBsAg的检测方法临床实验室中多采用胶体金法（GIA）和酶联免疫法（EIA）。为提高检测的准确性，笔者对HBsAg的检测方案作了探讨，通过近一年的实践总结，酶联免疫试剂与胶体金试剂相结合对检测HBsAg的准确性大有提高，几乎避免了假阳性和假阴性的发生，现报告如下：　　1材料与方法　　1.1标本于2006年1～12月我

2、院住院和门诊病人送检的HBsAg和乙肝两对半血液标本，不抗凝，保证正确处理血液标本得到待检血清，共计5819份。　　1.2试剂　　①酶联免疫试剂盒：科华、新创生产（选用年报批量前3名的试剂）；②胶体金试剂：新创生产（通过对比几个厂家，选用灵敏度最好的）；③HBsAg确认试剂：雅培（Murex）公司生产；所有试剂均按说明书进行操作。　　1.3仪器　　酶标仪：芬兰MK-3雷勃酶标仪；洗板机：科华ST-36W洗板机　　1.4方法　　所有初检标本先选用一个厂家的酶联免疫试剂检测，以酶标仪读数为准，按S/C.O.分类：①S/C.O.＞1的标本即EIA法阳性者，再用胶体金试剂测试，若亦为阳性者

3、即报告阳性；若为阴性者，则再用两种酶联免疫试剂做双孔复检，两种试剂均重复为阳性者则报告阳性；反之，建议做中和确认试验或PCR检测HBV-DNA来报结果。②对于S/C.O.介于0.5～1的标本，再用两种酶联免疫试剂做双孔复检，两种试剂均重复为阳性者则报告阳性；反之，建议做中和确认试验或PCR检测HBV-DNA来报结果。③对于S/C.O.＜0.5的标本直接报告为阴性。　　1.5其他　　如果受检者须在极短的时间内得到检测结果或标本出现严重溶血、脂血等状态而无法重新采集时，则直接选用胶体金试剂进行检测。在检测结果中必须注明检测方法为GIA，必要时通知重新采样再用酶联免疫试剂复检。　　2结果

4、　　2.1酶联免疫试剂初检5819份标本，其中S/C.O.＞1为阳性者426份；S/C.O.介于0.5～1者28份；S/C.O.＜0.5为阴性者5365份。　　2.2对S/C.O.＞1为阳性者426份再次用胶体金试剂全部重复检测，重复阳性者有411份直接报告阳性，还有15份为阴性者。　　2.3对以上S/C.O.介于0.5～1者28份和酶联免疫试剂阳性而胶体金试剂阴性者15份共计43份，再用两种酶联免疫试剂做双孔复检。　　2.4再同时用HBsAg中和确认试剂复检。结果见表1。表1EIA与GIA检测结果（略）　　3讨论尽管EIA的灵敏度和特异性比较高，但影响酶联免疫试剂检测结果的因素较

5、多，如：血液样本的处理、加样操作、温育洗板、比色判读、质控的好坏、试剂盒的质量直接决定了结果的准确性，也就是说检测过程中偶然误差出现机率较大，在此不做讨论；通过采用敏感性和特异性均低于EIA的GIA复检，其偶然误差大大低于EIA，相互结合、优势互补，经济、快速、准确［2］。有资料证明［3］，在我国的乙型肝炎病毒感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平状态存在，HBsAg蛋白的决定簇结构突变，造成不同的HBsAg试剂对突变株的检测能力不同，这些不同可能造成不一致的检测结果；血液中某些因子或药物的干扰，造成标本出现用酶联免疫试剂检测S/C.O.值介于0.5～1之间，及酶联免疫试剂阳性

6、而胶体金试剂阴性者。对于用酶联免疫试剂检测S/C.O.值介于0.5～1之间的标本，及酶联免疫试剂阳性而胶体金试剂阴性者，通过两种酶联免疫试剂盒的双孔复检核对，HBsAg检测的准确性大大提高［4］。对于一些疑难特殊的标本可作HBsAg中和确认试剂得到可靠结果。在本观察中，S/C.O.介于0.5～1者28份，双孔复检和中和确认均检出2份阳性；酶联免疫试剂阳性而胶体金试剂阴性者15份，双孔复检出11份阳性，中和确认结果10份阳性，二者检测结果基本相符。两者联合，使检测结果的准确度大为提高，值得在临床推广。【