吡柔比星对hl

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1、吡柔比星对HL高吉照许伟薛天阳安琪【关键词】:吡柔比星;,.freelol.L(终浓度)的THP继续培养12h;用DNA梯状凝胶电泳法(DNAladderelectrophoresis)和流式细胞检测技术(floetry,FCM)分别检测HL-60细胞的凋亡率。第2部分也分为A、B2组,A组加PBS液继续培养3h.freelol.L(终浓度)的THP继续培养3h;用FCM检测NF-κBp65活化率。结果1、10、100μmol.L的THP诱导HL-60细胞的凋亡率分别为(31.78±4.31)%、(47.25±5.27)%、(56.49±1.59)%,组间及与对照组(6.46±1.45

2、)%比较差异有统计学意义(P0.05);诱导的HL-60细胞NF-κBp65活化率分别为(16.21±1.20)%、(23.98±3.21)%、(32.44±2.89)%,组间及与对照组(8.44±2.20)%比较差异有统计学意义(P0.05)。DNA梯状凝胶电泳Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol.LTHP、10μmol.LTHP、1μmol.LTHP、对照组。结论THP在促进HL-60细胞凋亡的同时有诱导其NF-κBp65活化的作用,均存在剂量依赖。关键词:吡柔比星;HL-60细胞;细胞凋亡;核因子-κBp65Abstract:ObjectiveToexplorethe

3、effectsofpirarubicin(THP)ontheapoptosisandtheactivityofnuclearfactorkappaBp65(NF-κBp65)ofHL-60cells.MethodsTheexperimentediaofgroupA,andTHP1,10and100μmol.LaddedinthemediaoftherespectiveBsubgroups.Theap-optosisofHL-60cellsinedbyDNAladderelectrophoresisandfloetry(FCM).Inthesecondpart,Thecellsilart

4、othatinthefirstpart,exceptforthattheculturesinedbyFCM.ResultsTheratesofapoptosisofHL-60cellsinducedbyTHP1,10and100μmol.Letime,promotestheactivationofNF-κBp65ofHL-60cellsindose-dependentmanner.Keyg.L葡萄糖,青霉素、链霉素各200U.L)中传代培养,每3~4天传代1次。培养条件:5%CO2,饱和湿度,37℃。1.2.2第1部分―――HL-60细胞凋亡指数生长期HL-60细胞1×106.L,置于

5、96孔培养板内,每孔各1ml,分别培养2h后,分为2组。A组加PBS液0.1ml;B组又分为3组,各组分别加入终浓度为1、10、100μmol.L的THP各0.1ml,各组继续培养12h后待测细胞凋亡率。1.2.3第2部分―――HL-60细胞NF-κBp65活化指数生长期HL-60细胞1×106.L,置于96孔培养板内,每孔各1ml,分别培养2h后,分为2组。A组加PBS液0.1ml;B组又分为3组,各组分别加入终浓度为1、10、100μmol.L的THP各0.1ml,各组继续培养3h后待测NF-κBp65活化率。1.2.4DNA梯状凝胶电泳法检测细胞凋亡率分别取第1部分各组样本200

6、μl加入400μl细胞裂解液,按照DAN电泳试剂盒说明书提取DNA。每孔取样8μl,混以含溴酚蓝的样品缓冲液,同时用Pharm-cia100bp的Marker,加入1.8%琼脂糖灌注的凝胶加样孔中,电压85V,30min,)3种THP浓度诱导HL-60细胞凋亡率组间两两及与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),组间方差齐性检验F=679.19。见表1。表1不同剂量THP诱导HL-60细胞的凋亡率的比较与A组比较:*P0.05;THP组两两比较:P均0.052.1.2DNA梯状凝胶电泳法Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol.LTHP、10μmol.LTHP、1μmol.L

7、THP、对照组。见图1。3讨论3.1THP对HL-60细胞凋亡的影响凋亡又称程序性死亡,受多基因调控,多种细胞因子参与。凋亡细胞在细胞形态学、生化学上均发生了特征性的变化,包括DNA片段化(fragmentation)、染色质浓缩、包膜泡化(blebbing)、细胞皱缩、凋亡小体形成、细胞内Ca2+浓度快速持续升高、相关酶的变化(如内源性核酸内切酶和转谷氨酰胺酶等)、表面结构的变化等,最终导致细胞裂解,其与细胞坏死有本质区别。诱导白血病细胞凋亡

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