硫酸亚铁对溃疡性结肠炎模型大鼠氧化应激状态的影响

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1、硫酸亚铁对溃疡性结肠炎模型大鼠氧化应激状态的影响作者：张道权，吴正祥，吴强，杨枫，吴正升【摘要】目的考察口服硫酸亚铁（FeSO4）对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠氧化应激状态的影响。方法采用TNBS乙醇溶液复制UC大鼠模型，雄性SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、FeSO4对照组（100mg·kg-1·d-1）和FeSO4低剂量组（50mg·kg-1·d-1）、中剂量组（100mg·kg-1·d-1）和高剂量组（300mg·kg-1·d-1），给药2周后分别观察大鼠的

2、一般状态、组织病理学变化、组织及血清超氧化物歧化酶（SOD）与丙二醛（MDA）水平。结果FeSO4中、高剂量组大鼠体质量减轻，腹泻动物数增加，结肠组织损伤加重，血清与结肠组织SOD活性降低、MDA水平升高（P<0.05）。结论UC模型大鼠体内存在氧化应激，口服补充FeSO4可能会进一步加剧其体内氧化应激状态及结肠组织病理学损伤。【关键词】硫酸亚铁;溃疡性结肠炎;三硝基苯磺酸;氧化应激;大鼠　　溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）是一种病因不明的直肠和结肠慢性非特异性炎症，临床主要表现为反复发作的腹痛、腹泻

3、及黏液脓血便，重症或病情持续活动的患者可出现缺铁性贫血。临床观察发现，给予UC患者口服铁剂不能很好地被耐受，甚至会加重胃肠道症状或促进疾病活动［1］。硫酸亚铁（ferroussulfate，FeSO4）是临床最为常用的铁剂之一，同时也是一种强氧化剂，可能会因产生自由基（oxygen-derivedfreeradicals，OFR）而加重组织损伤［2］。本实验利用三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzenesulfonicacid，TN-BS）复制UC模型，观察FeSO4对UC模型大鼠氧化应激状态的影响，为临床治疗提供依

4、据。　　1材料和方法　　1.1药物和试剂　　TNBS购于Sigma公司，5%（DA）、超氧化物歧化酶（SOD）、考马斯亮兰蛋白检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品，批号为20060323。　　1.2动物　　雄性SD大鼠60只，体质量200～220g，由安徽医科大学实验动物中心提供，普通级。　　1.3仪器　　756MC紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），TGL-16H高速离心机（珠海黑马医学仪器有限公司），可控式硅恒温水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司），QL-901漩涡混合器（江苏海门麒麟医用仪表厂），电子分析天平（上海

5、天平仪器厂），DIAX-900内切式组织匀浆机（德国HEidolph公司）。　　1.4大鼠UC模型制备［3］　　健康大鼠60只，随机分为6组。留2组作正常对照组与FeSO4对照组，余4组均制备模型，禁食不禁水24h后，腹腔注射3%戊巴比妥钠（1ml·kg-1）使大鼠轻微麻醉后，将直径2mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约8cm处，将TNBS（125mg·kg-1）的50%乙醇溶液缓缓注入到大鼠肠腔内，提起大鼠尾部，倒置30s，使造模剂充分渗入大鼠肠腔。　　1.5分组及给药　　将正常大鼠随机分为正常对照组与FeSO4对照组，每组1

6、0只;将造模大鼠随机分为模型对照组，Fe-SO4给药高、中、低剂量组，每组10只。FeSO4对照组大鼠，按照100mg·kg-1·d-1灌胃FeSO4混悬液;Fe-SO4高、中、低剂量组大鼠，分别按照300mg·kg-1·d-1、100mg·kg-1·d-1、50mg·kg-1·d-1灌胃FeSO4混悬液;正常对照组及模型对照组大鼠每天灌胃同体积生理盐水，各组大鼠均在造模后6h开始给药，连续给药2周。　　1.6症状观察　　每天对各组大鼠进行称重，观察体质量变化并记录;观察大鼠粪便形状，记录大鼠发生腹泻、血便的数量。　　1.7结肠黏

7、膜组织损伤评分　　各组大鼠给药2周后，3%戊巴比妥钠过量麻醉，腹主动脉取血2ml，离心后置-80℃冰箱保存备用。将肛门以上10cm肠段取出，沿肠系膜纵行切开，用冰生理盐水冲洗，并称量。将黏膜向上展开，观察黏膜损伤并按照。同时取少量炎症肠组织，迅速放置液氮罐中备用。　　1.8病理组织切片观察　　取肛门以上8cm肠段卷起，置10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，行4μm厚连续切片，HE染色观察组织学变化。　　1.9生化指标测定　　血清及结肠组织MDA、SOD均按照检测试剂盒说明书进行操作。　　1.10统计学处理　　计量指标以x-±s表示，

8、多组间比较行方差分析，各组间两两比较行LSD检验，采用SPSS12.0软件进行统计分析。　　2结果　　2.1一般状态及大便性状的变化　　见表1。正常组与FeSO4对照组大鼠活动如常，反应机警，毛发有光泽，饮食正常，体质量增长较多，无腹泻及便血;制模