荧光pcr 技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的研究

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1、荧光PCR技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的研究吴桂芬1罗可天1姚伯宁2梁晅1罗丽文31.广州市越秀区疾病预防控制中心微生物检验科，广东广州510000；2.广州市越秀区疾病预防控制中心主任室，广东广州510000；3.广州市越秀区大塘街社区卫生服务中心，广东广州510000[摘要]目的寻找从业人员肠道传染病菌的快速筛查技术方法。方法以参加健康体检的从业人员作为研究对象，采集健康体检从业人员的肛拭子标本，采用荧光PCR技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的方法进行沙门氏菌和志贺氏菌检测，并与国家标

2、准方法进行对照，比较两种检测方法的检出率结果。结果58176份样本中，共检出52份沙门菌阳性标本，阳性率为0.89‰，检出51份志贺氏菌阳性标本，阳性率为0.88‰。合计共检出致病菌103份，检出率为1.77‰。荧光PCR对沙门菌和志贺氏菌的灵敏度达到了100%，特异性也保持在99%以上。结论采用荧光PCR技术进行肠道致病菌的快速筛查能缩短检验时间，检验准确性高，从而有效阻断肠道传染病的传播和食物中毒的发生。.jyqkunityHealthServiceCenter，Guangzhou，Guang

3、dongProvince，510000，China[Abstract]ObjectiveTofindoutadetectionmethodforrapidlydetectingtheentericpathogensinpractitionersinfoodindustryandpublicplaces.MethodsThepractitionersunderinationensofthemethodforrapidlydetectingbatchentericpathogensmixedsampl

4、esonellaandShigella，andethod.Thedetectionrateofthesetethodsples，52samplesonellaplesethodforSalmonellaandShigellaethodforrapidlydetectingtheentericbacteriacanshortenthedetectiontimebut左右，旋转3周后取出样本，然后将样本放入采样管中进行保管。各种细菌的增菌及分离所用试剂和培养基均为广东环凯微生物科技有限公司产品，细菌生

5、化鉴定条法国生物梅里埃产品，实时荧光PCR检测试剂盒为深圳生科源技术有限公司产品，血清诊断试剂为宁波华润生物制品研究所产品。②荧光PCR检测。首先将采集到的样本放入37℃的恒温箱中进行培养，时间在3~6h。然后将每份培养后的标本取80μL，每10份标本混合为1组[2]，然后进行混合，再加入20μLDNA提取液进行充分混合，标本混合后做好编号、记录。然后抽取5μL的混合标本加入8联PCR反应管内。并对所抽取的标本进行5min的离心。此时8联PCR反应管有8份混合标本，实际代表了80份的标本[3]。然

6、后将反应管中的标本置于荧光PCR仪上进行检测。③对所有样本同时以传统分离培养方法作为“金标准”进行检验[4]。1.3观察指标①荧光PCR技术检测结果判断；②对比荧光PCR技术检验和“金标准”的检测速度、灵敏度和特异性。1.4统计方法采用SPSS18.0软件对数据进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，用（x±s）表示。2结果2.1荧光PCR技术中阳性检测情况58176份从业人员肛拭子样本的检测结果中，共检出52份沙门菌阳性标本，阳性率为0.89‰，检出51份志贺氏菌阳性标本，阳性

7、率为0.88‰。合计共检出致病菌103份，检出率为1.77‰。见见表1。2.2荧光PCR技术检验和“金标准”的检测速度、灵敏度和特异性对比荧光PCR技术的检验时间明显短于“金标准”的检验时间（P＜0.05），且灵敏度和特异性高。具体结果见表2、3。3讨论随着科技的进步，医疗诊断技术的完善，检测技术的快速化、自动化、准确化已经成为各类检测方法的发展趋势[5]，而对于从业人员肠道致病菌的检查更是关系到食品卫生安全，更应该受到更多的关注。荧光PCR技术用于从业人员体检肠道致病菌快速检测，其具有高灵敏性和

8、高准确性，能够提高致病菌的阳性检出率[6]，从而有利于防止疾病的传播。利用荧光PCR技术进行肠道致病菌的检测简单、快速，可以在4~5h内完成肛拭子样本的初步筛查，并且可以排除隐形标本，可以在第2个工作日完成，第3个工作日就可以领取相应健康证明[7]，而以传统分离培养方法的“金标准”则在第4个工作日时才能完成检验[8]，且操作程序复杂，主观影响因素较大，极易产生检测误差，影响检测结果[9]。采用荧光PCR技术进行检查，可以有效缩短检验时间。另外，荧光PCR技术可以显著减少后期细菌的培