生物选修一 5-1 dna的粗提取与鉴定

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1、讨论：1.构成生物体的遗传物质是什么？2.细胞滤液中又哪些成分？3.怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分1.DNA在NaCl溶液中的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？当氯化钠的物质的量浓度为2mo

2、l／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0．14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出2.DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。3.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响；②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80℃以上才会变性；③洗涤剂可以溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响。4.DNA的鉴定DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可作为鉴定DNA的试剂（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取

3、含DNA的滤液DNA含量高的生物材料动物细胞植物细胞思考与讨论：1.可否选用哺乳动物的红细胞作为实验材料？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是低渗液体，水分子可大量进入血细胞，使其胀裂；而搅拌加速了鸡血细胞的破裂，从而释放出DNA。2.用鸡血做实验材料时，在破碎细胞前要做何处理？3.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：哺乳动物的红细胞没有细胞核，DNA含量较低，因而不宜作实验材料。1.提取植物细胞DNA时，加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂能溶解细胞膜，利于DNA的释放；食盐的成分是NaCl，利于DNA的溶解。2.如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？答：会使细胞核内的DNA释放不

4、完全，提取的DNA量少，影响实验结果（看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色）。3.研磨过滤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有核蛋白、糖类、RNA等杂质。（三）去除滤液中的杂质方案一：为什么反复溶解与析出DNA，能够去除杂质？答：用高盐浓度（2mol/L）溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度（1.4mol/L）溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的杂质。方案二、方案三：方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和

5、蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。（四）DNA的析出与鉴定析出：冷却的酒精溶液（体积分数为95%）。鉴定：二苯胺试剂（沸水浴）1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNAB2.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色D制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心↓破碎细胞，释放DNA…加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核内DNA…………加入N

6、aCl至2mol/L，同一方向缓慢搅拌↓→过滤，除去不溶杂质DNA析出……向上述滤液缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl浓度为0.14mol/L）↓→除去细胞质中的大部分物质过滤出含DNA的丝状物↓DNA丝状物再溶解：再次用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA↓DNA初步纯化……与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA鉴定………………二苯胺，沸水浴，呈现蓝色实验操作