志贺氏菌显色培养基上假阳性菌的进一步鉴定与分析

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1、志贺氏菌显色培养基上假阳性菌的进一步鉴定与分析曾茜茜1饶瑞瑛1施晓峰2柳景青3程东庆1（通讯作者）（1浙江中医药大学医学技术学院浙江杭州310053）（2浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053）（3浙江大学建筑工程学院浙江杭州310058）【摘要】目的：对志贺氏菌显色培养基上的假阳性菌进行鉴定，为进一步鉴别志贺氏菌并改良显色培养基提供数据。方法：将木实验室前期分离自自来水管网生物膜的52株志贺氏菌显色培养基上假阳性菌，通过生化方法进行进一步鉴定。结果：经鉴定52株菌均为革兰阴性非志贺氏菌，分别为9个属：假单胞菌属（48.08%）、埃希氏菌属（17.31%）、枸橼酸杆菌属（13.46%）

2、、不动杆菌属（7.69%）、普罗菲登斯菌属（3.85%）、弧菌属（3.85%）、肠杆氏菌属（1.92%）、变形杆菌属（1.92%）、寡养单胞菌属（1.92%）。结论：有多种菌可能干扰显色培养基对自来水管网生物膜样木中志贺菌的分离鉴定，假单胞菌属的干扰性最大,需针对这些假阳性菌与志贺氏菌的生理生化特性改良志贺氏菌显色培养基。【关键词】假阳性菌；检测；改良【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）16-0258-02志贺氐菌（Shigella）俗称喇疾杆菌，是引起人细菌性喇疾的肠道病原菌，只需少量就可以发病，对人类生命安全和社会稳定有较大影响［1］。随着微生物实

3、验技术的发展，志贺菌的检测鉴定技术也不断完善，大致可以分为如下几类方法:培养与生化鉴定，免疫学鉴定，毒素检测以及分子生物学检测［2］。这几种检测方法都各有利弊。大量的文献报道表明显色法具有相对较高的敏感性和特异性，操作简便、快速，可大大节省人力和物力，因此目前显色培养基法被广泛应用于大量样品的初筛［3-6］。我们实验室开展自来水管网生物膜微生物的调查研究，用志贺氏菌显色培养基分离志贺菌时发现，一些菌落为白色或无色的可疑菌，与志贺氏菌诊断血清不能发生凝集。本研究对这些假阳性菌进行进一步鉴定与分析，旨在揭示实验干扰菌的本质，为改进实验工艺提高分离率奠定基础。1.材料与方法1.1材料1.1.1菌株实

4、验室保存的志贺氏菌显色培养基上白色或无色的可疑菌，但诊断血清凝集阴性的菌。1.1.2主要仪器全自动微生物生化鉴定仪（VITEK2COMPACT；生物梅里埃公司）；生化培养箱（SHP-25O型；上海森信实验仪器有限公司）；高压蒸汽火菌（YXQ-LS-1OOSII型，上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；电热恒温鼓风干燥箱（DGG-9240A型，上海森信实验仪器有限公司）。1.1.3主要试剂营养琼脂培养基（杭州微生物试剂奋限公司）；志贺氏菌显色培养基、细菌微量生化鉴定管（青岛海博生物技术有限公司）；其他常用试剂均购自华东医药有限公司器材化剂分公司。1.2方法52株菌经营养琼脂活化后，革兰染色。若革兰染

5、色为阳性球菌，做细菌微量生化鉴定，鉴定方法参照扪杰细菌鉴定手册第八版。若为革兰阴性杆菌，做氧化酶和0/F实验，将氧化酶阴性、0/F结果为发酵型的细菌做肠杆菌科生化编码鉴定；氧化酶阳性、0/F结果为发酵型的做弧菌科生化编码鉴定；氧化酶阳性、0/F结果为氧化型的做非发酵生化编码鉴定。微量生化鉴定方法难以鉴定的菌株，做自动化鉴定。2.结果2.1菌落形态与革兰染色志贺氏菌显色培养基上志贺氏菌显白色或无色，图1所示，奋些宋内氏志贺氏菌冇蓝色中心；人肠杆菌和人肠菌群显绿色或黄色；沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心；其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长。1.讨论志贺氏菌是引起人类肠道疾病常

6、见的病原菌，在我国感染性腹泻病原菌中高居首位。为了能够有效地预防、治疗和控制水或食源性传染病，对水或食品中的志贺氏菌的建立快速、有效地检测和鉴定方法显得尤为重要［7】。显色培养基因为将微生物的分离与鉴定合二为一，具有省时省力、操作简便、敏感性和特异性都较高的优点,特别是能与常规检测方法较好地接轨而越来越受到国内外的关注［8】。我们选用的志贺氏菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，其利用志贺氏菌属生化反应不活跃的特性，使非0标菌与志贺氏菌显现不同颜色来对志贺菌属进行分离和初步鉴别。培养基中混合显色剂对应不同细菌的酶发生特异性反应，水解底物，释放显色基团；特殊营养物质提供细菌生长所需物质；琼

7、脂是培养基的凝固剂。显色培养基上，志贺氏菌显白色或无色，奋些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心。因人肠杆菌和人肠菌群在培养基上显绿色或黄色；沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心；其他细菌显蓝绿色或黄色；变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长，可排除非0标菌对志贺氏菌的干扰。基于志贺氏菌显色培养基上也可能存在无色透明菌但不是志贺氏菌这一情况，本实验对28个水样中分离到52株在志贺氏菌显色培养基上观察为可疑菌，但未发生志