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1、射频能量在治疗关节软骨退变中对软骨细胞及基质的影响作者：孙建华刘维钢史晨辉王永明董金波李宽新何斌【关键词】细胞死亡摘要：［目的］实验研究射频消融能量大小与关节软骨细胞及基质损伤效应之间的关系。［方法］建立牛膝关节软骨退变模型，模拟膝关节镜环境，射频消融气化仪在15、40、70ethod］Traumaticdegenerativearthritismodelsininediodide)doublefluorescentstain,andGAG(glucosamineglucan)releaserateeasured［Result］Foll
2、oortalityrateofcartilagecellsatrixdamageasortalityofcartilagecellsKey×1cm)。参数设定选择CUT1、CUT3、CUT5，相对应输出能量为15、40、70EM培养基，100ml／LFBS，37℃50ml／LCO2)，用于软骨细胞活性检测。B组织块电子天平称质量并记录，无菌下切成1mm×1mm×1mm小块，放入24孔培养板培养，加入培养基10ml，用于葡糖胺聚糖（glycosaminoglycan,GAG）释出率测定。每日换液。13软骨组织块即时损伤观察指标131HE染
3、色培养后第4d，将A组织块分为A1、A22部分，将A1组织块放入10%福尔马林溶液中固定，经脱水、透明、制作蜡块、切片、HE染色，在显微镜下观察，坏死细胞的细胞核散大、消失，呈空泡状。高倍镜下取10个视野（表层5个，中层5个），细胞空泡率=空泡细胞/细胞总数×100%。132细胞活性检测培养后第2d，A2组织块用双面剃刀切成05mm薄片，放入含3mg/L二乙酸荧光素（flurescEIndiacetate,FDA)PBS液中，37℃孵育5min，然后，放入含10mg/L碘化丽啶（propidiumiodide,PI）PBS液孵育1min
4、，PBS液冲洗3遍，倒置荧光显微镜下观察。在蓝色激发光下活细胞呈绿色，在红色激发光下死细胞呈鲜红色。使用双重曝光拍照，每份切片取6个视野（表层3个，中层3个）死亡率=死亡细胞/（死亡细胞+活细胞）×100%。133软骨组织GAG释出率测定第4d，把B组织块前3d收集的培养基用阿利新蓝法测定GAG（glycosaminoglycan）含量〔2〕。根据组织块的原始质量，换算成GAG释放率。GAG相对释出量=GAG含量/组织块质量。统计学处理：应用SPSS110统计软件，进行单因素方差分析法。2结果21HE染色对照组空泡率为1896%，15W
5、为2795%，与对照组相比，差异无显著性（P＞005）。当输出能量增加至40、70W时，软骨细胞空泡率分别增加至5507%、6513%，与对照组相比，软骨细胞空泡率明显增加（P＜005),结果见表1。22细胞活性检测对照组死亡率为1783%，15W为4465%，两组相比，差异无显著性（P＞005）。当输出能量增加至40W及70W时，软骨细胞死亡率为100%，与对照组相比差异具有显著性（P＜005），结果见表1。表1细胞活性检测软骨细胞空泡率及死亡率(略)注：与对照组比较23软骨组织GAG释出率测定射频消融输出能量达到15］.第2版，上海
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