腺病毒介导hsv论文

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1、腺病毒介导HSV论文【关键词】神经胶质瘤【Abstract】AIM:ToobservekillingactionofHSVtk/GCVsystemongliomacells.METHODS:C6cellseasuringtheadenovirustransfectedefficiency.C6cellssurvivalandbystandereffectgL-1GCVtotransfectedcells.RESULTS:Themorethemultiplicityofinfection(MOI),themoretheadenovirustransfected

2、efficiencytoC6cells(r=0.819,P0.05).100%transfectedefficiencyneededMOI100.ThekillingactionofHSVtk/GCVonC6cells,dependedontheamountofAdCMVtk(r=0.870,P0.05).ThereediatedHSVtk/GCVsystemhasgoodkillingeffectongliomaC6cells.【Keya【摘要】目的：观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/丙氧鸟甘(herpessimplexvirusthymidi

3、nekinase/ganciclovirHSVtk/GCV)系统对脑胶质瘤细胞的杀伤作用.方法：将AdCMVLacZ感染胶质瘤细胞C6，Xgal染色，测定腺病毒的转染率.AdCMVtk感染C6细胞后加入10mgL-1GCV，观察肿瘤细胞存活率及旁观者效应.结果：tk基因对C6细胞的转染率随着腺病毒的感染复数（MOI）量增加而增加(r=0.819,P0.05)，100%转染所需要的MOI为100.AdCMVtk/GCV对C6细胞的杀伤强度与AdCMVtk的量成正相关(r=0.870,P0.05).此杀伤作用存在旁观者效应，且较强.结论：腺病毒介导的HSVtk/

4、GCV系统具有杀伤脑胶质瘤的作用.【关键词】tk基因；腺病毒；神经胶质瘤0引言HSVtk基因是一种自杀基因，其产物将无毒的核苷类似物转变成有毒物质，干扰肿瘤细胞DNA合成.freela公司产品.293细胞、C6细胞由本室保存，均在含100mLL-1新生牛血清（Gibco公司产品）、100mgL-1青霉素、100mgL-1链霉素的RPMI1640（Gibco公司产品）培养基中培养.1.2方法AdCMVLacZ，AdCMVtk在293细胞中扩增，氯化铯密度梯度离心法纯化，以含100mLL-1甘油的透析液透析，并用噬斑分析法测定腺病毒滴度.C6细胞按2×105/孔

5、接种于6孔板，用感染复数（MOI）为1，10，50，100和200的AdCMVLacZ感染48h后用0.5gL-1戊二醛固定，Xgal（终浓度1gL-1）染色.光镜下观察，蓝色细胞说明有LacZ基因表达，即已被腺病毒转染.计蓝色细胞占细胞总数的百分率，即腺病毒的转染率.实验重复3次，取其平均值.C6细胞按5×103/孔接种于96孔板，24h后用不同MOI的AdCMVtk（1，10，50，100和200）感染，3h后加入10mgL-1GCV，对照组加PBS，每组设3复孔.5d后每孔加入5gL-1MTT10μL，4h后吸掉上清，加入50μL二甲基亚砜，振荡混匀后

6、，用酶标仪测定A值.细胞存活率按公式（A实验组/A对照组）×100%计算.未转染的C6细胞与转染的C6细胞以不同比列混合，接种于96孔板（5×103/孔），转染的C6细胞占的百分率分别为10%，20%，30%，40%，50%和60%.24h后加入10mgL-1GCV，第5日计算每孔细胞的存活率.统计学处理：数据采用SPSS10.0统计软件包处理.2结果2.1重组腺病毒对C6细胞的转染率AdCMVLacZ和AdCMVtk的滴度均为2×1012PFUL-1.腺病毒对C6细胞的转染效率与腺病毒量有关.随着MOI的增加，腺病毒对C6细胞的转染率增加，两者呈正相关(r

7、=0.819,P0.05)，当MOI为1，10，50，100和200时有6%，19%，82%，100%和100%的C6细胞可被AdCMVLacZ转染(Fig1).2.2AdCMVtk/GCV系统对C6细胞的杀伤作用经不同MOI（1~200）的AdCMVtk感染C6细胞后给予GCV，计算细胞的存活率，实验组随着MOI的增加，C6细胞存活率减少两者呈正相关(r=0.870,P0.05).MOI为1，10，50和100时细胞存活率为91%，56%，38%和6%，MOI为200时几乎无细胞存活（Fig1）.而对照组单独使用AdCMVtk（MOI100）对细胞无杀伤作

8、用.■：Transfectionefficiency