腺病毒载体介导的遗传病基因治疗研究和应用进展论文

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1、腺病毒载体介导的遗传病基因治疗研究和应用进展论文关键词：人类腺病毒；遗传性疾病；基因疗法一群分布广泛的呼吸道病毒，A:60～90nM，无包膜，20面体立体对称型。分为大约47个血清群，其中Ad2、Ad4、Ad5和Ad7在疫苗和基因转移载体研究方面，应用最普遍。腺病毒粒子衣由252个壳粒组成，几何排列成240个非顶角六邻体和12个五邻体。基因组为双股DNA，呈线性.freelarchand等2将Ad-α1-AT通过气管内滴注给小鼠后，在呼吸道上皮内可检测到人α1－ATmRNA，说明在肺组织内可合成并贮存人α1-AT。在鼠的呼吸道粘液中也可检测到人α1-AT（1.7μM），但会逐渐减

2、少，一周后完全检测不到。通过静脉灌注，24小时后，可检测到平均13μg/ml的α1-AT，证实了重组Ad载体介导的体内内皮细胞基因转移的可能性。最近，Kochanek等3利用缺失了整个病毒编码基因的Ad载体，鼠尾静脉注转移19kb的人α1-AT基因组，发现13周内在鼠血清中可检测到大约1μg/ml的α1-AT。三、腺病毒介导的低密度脂蛋白受体基因转移家族性高胆固醇血症（familialhypercholesterolaemia,FH）是由低密度脂蛋白（loVLDLR静脉注射LDLR（-/-）小鼠，结果表明，感染后4～9天，小鼠体内总胆固醇水平减少50%。Ad载体介导的LDL和VL

3、DL受体基因转移方法是一种治疗LDL或VLDL受体缺乏的有效方法，不足之处在于基因的表达量需加强。四、腺病毒介导的囊性纤维变性转导调节因子（CFTR）基因转移Ad载体介导的囊性纤维变性（cysticfibrosis,CF）基因治疗是Ad载体体内基因治疗最早的例子。一些科学家做了大量的工作，先后克隆了CFTR基因，构建了E1区缺失的AdcFTR载体，在CF小鼠、棉鼠、非人灵长类动物，人呼吸道上皮细胞中，完成了该载体的安全性、毒性和生物学效应的研究。尽管CFTR的基因转移率较低，但在感染细胞中，CFTR的基因表达要体内外都能被检测出来。动物模型研究和临床试验表明，CFTR基因表达是短

4、暂是，并且随着宿主细胞免疫反应的发展而终结。这促使人们改进缺失E1区的Ad载体，试图发展既缺失E2A区，又缺失部分E4区的新一代载体。最近，Fisher6等开始研究缺失所有病毒编码序列的Ad载体，并且开始应用该载体把CFTR表达盒转移到人气管上皮细胞内。五、腺病毒介导的杜氏肌肉营养不良症（DMD）基因转移DMD是由于功能性营养蛋白缺乏而引起的致死性遗传病。DMD的基因治疗就是通过质粒表达载体和重组病毒（如逆转录病毒和腺病毒等）载体，将功能性营养蛋白的cDNA导入肌肉细胞内。Hauser等7在转基因mdx小鼠中，分别转移6.3kb的一段基因和cDNA全基因，证实可以部分或全部纠正小

5、鼠的病理症状，小鼠的肌肉力量可以恢复。1993年，Vincent等8最早通过缺失E1区Ad载体的介导，将微小基因转移到新生的小鼠肌肉中，观察到DMD症状明显减弱。1996年，Acsadi等在利用mdx小鼠进行的腺病毒介导的营养不良微小的基因转移中也证实了这一点。最近，Kochanek等10利用一种微小腺病毒载体，把全长DMDcDNA转运到mdx小鼠的肌肉中也取得了很好的效果。六、腺病毒介导的Ⅸ因子基因转移血友病B（haemophiliaB）是一种血液凝血因子IX（FIX）缺乏综合症。现已通过不同的基因转移方法在体内，外作了大量的基因转移实验。在动物模型中，把FiX基因转移到成纤维

6、细胞、内皮细胞、成肌细胞和角质形成细胞中，但表达水平较低。利用Ad体内基因治疗血友病B正在取代逆转录病毒介导的方法。Smithtag等11通过AvIH9B载体把呼吸道合胞病毒（RSV）启动子启动的FiXcDNA表达盒注射小鼠尾静脉中，结果可在肝得到有将效转导，9周后，其表达水平才会慢慢减弱。Dai等12用Ad载体把带有巨细胞病毒（CMV）增强启动子的FIX表达盒肌肉注射到裸鼠体内，血浆中可得到人FiX的高水平表达（1～5μg/ml），持续时间1年。如果载体在小鼠骨有某种免疫活性，血浆FiX的表达时间会缩短，表达量会降低，在血友病犬模型中也证实了这些结果。七、腺病毒介导的Ⅷ因子基因

7、转移血友病A（haemophiliaA）是由Ⅷ因子正常或缺陷引起的，主要表面为不自主的出血并发症。早期，采用细胞移植、反转录病毒载体等方法在动物模型中仅能得到FⅧ低水平表达和分泌。现在采用缺失E1区的Ad载体，转运B区缺失的FⅧ（BODfⅧ）的cDNA，感染1周后，在HepG2细胞系和C57BL/6小鼠中，FⅧ得到了30793ng/ml的高水平表达。AvlALApH81是一种小鼠白蛋白启动子，由AvlALH91载体带有一个Apo-A1内含子和一个HNF3/eG-Tf连接位点改建而