不同溺死类型大鼠肺组织中应激相关基因的表达水平-研究

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1、·山西医科大学硕士学位论文放置2—3d的自来水，水温10℃)。解剖大鼠，取其靠近右心室部位肺组织5g，放入装有1mlRNAlater的取样管中备用，－70℃低温冰箱保存。2.试验方法：组织提取RNA；RNA反转录为cDNA第一链；分别设计引物，通过实时荧光定量PCR检测8例大鼠肺组织中88种应激相关基因和6种常用的管家基因的Ct值。3.统计学处理：实验所得数据采用均数±标准差表示，使用SPSS13.0软件进行统计学分析，多样本均数比较采用方差分析，各组数据两两比较采用t检验。结果：1.本实验动物

2、模型建立过程中，8只大鼠均在入水10~13min后鼻部第一次呛水，典型溺死组大鼠从鼻部第一次呛水至大鼠在水中溺亡，平均耗时大于5min。随后大鼠尸体解剖观测到，非典型溺死组大鼠肺组织无肉眼可见的水性肺气肿，切面无溺液流出，胃腔内无溺液存在，该模型为有效模型。2.6种管家基因中GAPDH基因在多个样本中未检测到，故在进行数据统计时排除。其余5种管家基因（B2M、HMBS、HORT1、OAZ1、ACTB）稳定性好，经两组组间差异性检验，P值均大于0.05。3.选取的88种应激相关基因在两组的表达均不

3、相同。组间表达差异倍数较大（绝对值＞2）的有25个，分别是HRH1、JUN、CCL2、HSPB7、HDAC5、HDAC6、CXCL2、HSPB2、EP300、CCR4、CXCL10、CCL7、CCL5、STAC、HDAC4、MAP2K7、CIDEB、IL9、IL13、IL5、IL1A、CD40LG、HSPB3、SCARA5、FOS；差异表达有统计学意义（P＜0.1）的基因共有13个，分别是CCL2、CECPB、IL1A、IL13、CD40LG、MAPK1、IL1B、LIG1、CCL7、TAF1、

4、DGKK、CXCL1、CCR2。表达差异倍数较大且有统计学意义的基因共有5种，分别是CCL2、CCL7、IL1A、IL13、CD40LG。4.将13种组间有显著性差异表达（P＜0.1）的基因加入数据库进行GOterm富集分析，结果显示，这13种基因的主要功能体现在四个层面:一是对细胞因子活性、免疫应答和损伤应答的调节，对应的基因为CXCL1,CCL2,CD40LG,CCR2,IL1B,IL1A,CCL7；二是对大分子合成的正向调节和大分子代谢过程的正向调节，对应的基因为MAPK1、TAF1、CE

5、BPB、CD40LG、IL1B、IL1A；三是调控细胞增殖，···II···山西医科大学硕士学位论文对应的基因为CEBPB、CCL2、CD40LG、IL1B；四是对胞外空间的调节，对应的基因为CXCL1、CCL2、CD40LG、IL1B、IL1A、CCL7。结论：1.本实验所选内参照基因稳定性好，这与本课题前期实验结果相吻合。2.88种应激相关基因在两组的表达均不相同。其中，非典型溺死组与典型溺死组对比表达差异较大（绝对值＞2）的基因有25种，两组对比差异表达有统计学意义（P＜0.1）的基因共1

6、3种，这说明干性溺死与典型溺死两种死亡过程有不同的应激反应机制。3.以CCL2为代表的CCL家族基因和IL家族基因在典型溺死与非典型溺死两种类型死亡大鼠肺组织内的表达均有较大差异，是鉴别非典型溺死的有效生物标志物。4.研究结果提示我们，在接下来实验中应对CCL家族基因和IL家族基因进行深入的研究并扩大样本和应激基因库内其他应激基因的再筛选，最终推广到人类溺死尸体的法医学死因鉴定应用中。关键词非典型溺死；典型溺死；应激相关基因；CCL家族；实时荧光定量RT-PCR···III···山西医科大学硕士

7、学位论文ThestudyonexpressionofstressrelatedgenesinlungofdifferentdrowningratsAbstractObjective：Identificationofdeadbodyinwaterinalwaysadifficultpartinthefiledofforensicscience.Deathbeforeenteringthewaterorafterenteringthewateraretwocategoriesofdeadbodies

8、whichfoundinwater.Amongthemdeathafterenteringthewater,alsoknownasdrowning,canbedividedintotypicaldrowningandatypicaldrowning(drydrowning).Atpresent,theforensicidentificationofdrowningismainlymakeacomprehensivebodysignsandlaboratorydetection,allofthes