cox2抑制剂联合顺铂或x射线对a549肺腺癌细胞株的体外实验

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1、COX2抑制剂联合顺铂或X射线对A549肺腺癌细胞株的体外实验作者：熊建萍,陶庆松,张凌,徐俊,项小军,李思明,张锡泉,卢珊【摘要】目的观察环氧化酶2(COX2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)联合化疗药物顺铂(DDP)或联合X射线对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法应用MTS法分别检测Celecoxib与DDP联用对A549细胞增殖的影响及联合X射线对A549细胞存活分数(SF)的影响，流式细胞术检测细胞凋亡。结果在一定浓度范围内，Celecoxib和DDP均可抑制A549人肺腺癌细胞的生长，其抑制作用呈量效关系。两

2、者联用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg/L时两者具有协同或相加作用。Celecoxib与X射线联用可显著降低细胞存活分数(SF)，增加细胞凋亡率。结论Celecoxib与DDP联合可增强对A549人肺腺癌细胞的生长抑制效应；Celecoxib与X射线联合时，可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率，增强其对放射的敏感性。【关键词】肺癌;环氧化酶2;体外实验;凋亡;X射线基金项目：江西省科技厅自然基金课题资助　　TheDepressiveEffectofDetectedontheProliferationofA549HumanL

3、ungAdenocarcinomaCellLinesandCelecoxibbinedanlungadenocarcinomacells.MethodsThedepressiveeffectontheproliferationofA549cellsetry.ResultsEM培养基，于37℃、5%CO2、95%湿度CO2培养箱进行培养。待细胞呈对数生长，即用0.25%的胰蛋白酶溶液消化，分瓶并扩大培养。　　1.1.2主要试剂及仪器　　Celecoxib(昆山化工医药原料有限公司)，化学结构式为C17H14F3N3O2S，25℃溶于二甲亚砜(D

4、MSO)；DDP(云南个旧生物药业有限公司)。其他主要试剂仪器包括MTS/PMS(Promega)、酶联免疫检测仪、流式细胞仪和电子直线加速器(瑞典依科达公司)。　　1.1.3药物浓度参照其常用剂量在人体达到的血浆峰浓度，选择其血浆峰浓度的1/4～1/10倍范围，顺铂血浆峰浓度为2mg/L，Celecoxib血浆峰浓度为0.7mg/L。　　1.2方法　　1.2.1Celecoxib与DDP联合对A549细胞的影响　　MTS法检测细胞生长抑制。取96孔无菌培养板一个，每孔加入含有2×105/ml肿瘤细胞的DMEM细胞悬液100μl。设空白组(只

5、含等量溶剂)、Celecoxib组、顺铂组及联合组，每组3复孔，于37℃、5%CO2，饱和湿度条件下培养6h。肿瘤细胞完全贴壁后，实验组中分别加入不同浓度的干预药物，使DDP终浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0和8.0mg/L；Celecoxib终浓度分别为0.175、0.35、0.7、1.4和2.8mg/L；联合组Celecoxib浓度为0.35mg/L。继续培养48h后，每孔加入MTS/PMS混合液20μl培养2h，应用酶标仪,于492nm波长处测光吸收(OD)值。根据公式计算细胞生长抑制率(E)：E=1－实验组平均OD值/对照组平

6、均OD值×100%。按下式计算Q值并判断两药的联合效应[7]：Q=E(A+B)/[EA+(1－EA)×EB]，其中，E(A+B)为两药合用的抑制率，EA、EB为两药单用的抑制率。Q为0.85～1.15表示两药作用相加，Q＞1.15表示两药作用协同，Q＜0.85表示两药作用相互拮抗。上述实验重复3次。　　1.2.2Celecoxib与X射线联合对A549细胞的影响　　1.2.2.1X线照射条件　　细胞在室温下，直线加速器6MVX线、SSD照射，加2cm标准等效填充物(2cm厚有机玻璃板)，平均剂量率200cGy/min。　　1.2.2.2MT

7、S法检测存活分数　　取24孔培养板一个，设4Gy照射组及4Gy＋Celecoxib联合组，每组3复孔，按上述接种方法，每孔加入含有2×105/ml肿瘤细胞的DMEM细胞悬液100μl及DMEM完全培养基400μl；另取24孔培养板一个，设空白对照组3复孔，每孔加入细胞悬液100μl及DMEM完全培养基400μl，于37℃、5%CO2，饱和湿度条件下培养6h。空白对照组加入DMEM完全培养基500μl，联合组经不同浓度Celecoxib500μl处理，1h后经X线照射，继续培养5d，MTS法检测OD值，按下式计算存活分数（SF）：SF＝实验组平

8、均OD值/对照组平均OD值×100%。　　1.2.2.3流式细胞术检测细胞凋亡　　取对数生长期的A549细胞1×106/ml接种于培养瓶中，24h后换液。分为单纯照