HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系-论文.pdf

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1、772ChineseJournalofClinicalMedicine，2013．Vo1．20，No．6中国临床医学2013年12月第20卷第6期论著HIF一2基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系吴倩’袁凯钱成王勇”童继春袁卫东¨(1．南京医科大学附属常州第二人民医院血液肿瘤科，胸心外科，江苏常州213003；2．复旦大学附属中山医院胸外科，上海200032)摘要目的：探讨小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)沉默缺氧诱导因子2(hypoxiainduciblefactor2alpha，HIF一2a)基因表达后，人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化

2、。方法：构建靶向HIF一2d基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞，采用Real—timePCR检测HIF-2dmRNA的表达，采用Westernblotting检测HIF-2c~及多药耐药基因1(multidrugresistanee一1，Mdr一1)蛋白的表达，采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率。结果：在HIF2asiRNA转染A549细胞后24、48h后，HIF-2d在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调(均P<0．01)，Mdr一1蛋白的表达水平也明显降低(均P<()．05)。与空白对照组相比，HIF2dsiRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加，各时间点的I

3、C值均显著降低，差异有统计学意义(均P<()．01)。结论：靶向HIF一2“的siRNA表达载体能够有效抑制HIF一2a基因的表达，从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性。关键词肺腺癌；化疗耐药；缺氧诱导因子2a；小干扰RNA；多药耐药基因1中图分类号R734．2文献标识码ARelationshipbetweenHIF一2“GeneandChemotherapyResistanceofLungAdenocarcinomaA549CellstoCis—platinWUQianL4NKaiQIANChengW_ANGYongT0NGJichun础．NWP—dong1．DepartmentofH

4、ematologyandOncology，DepartmentofThoracicSurgery，ChangzhouSecondPeople’sHospital，NanjingMedicalUniversity，Changzhou213003，China；2．DepartmentofThoracicSurgery，ZhongshanHospital，FudanUniversity，Shanghai200032，ChinaAbstractObjective!Toinvestigatetheeffectofsilencinghypoxiainduciblefactor-2alpha(HIF一2

5、a)geneexpressionbysmallinterferingRNA(siRNA)onchemotherapyresistanceofA549cellstocisplatin．Methods：ThesiRNAeukaryoticexpressionvectorstargetingHIF一2agenewereconstructedandtransfectedintoA549cells．TheexpressionofHIF2amRNAwasdetectedbyreal—timePCR．TheexpressionofHIF一2aandmultidrugresistance1(Mdr-1)p

6、roteinsweredetectedbyWesternblotting．MTTassaywasusedtoexplorethesurvivalrateofA549cellsunderthetreatmentofcisplatin．Results：AftertransfectionofHIF一2asiRNAintoA549cellsfor24and48h，theexpressionlevelsofHIF2dmRNAandproteinwerebothdown—regulatedsignificantlycomparedwiththoseintheblankgroup(allP

7、Meanwhile，theproteinexpressionlevelofMdr一1alsodecreasedsignificantly(allP<0．05)．ThesensitivityofA549cellstocisplatinwassignificantlyincreasedinHIF2“siRNAtransfectiongroupcomparedwiththatintheblankgroup．TheIC5{)va