酶联免疫吸附法检测hbv抗

《酶联免疫吸附法检测hbv抗》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、酶联免疫吸附法检测HBV抗【摘要】目的鉴别并纠正酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙型肝炎抗-HBc过程中出现的假阳性结果。方法在乙型肝炎“两对半”临床检测标本中随即挑选抗-HBc阳性的标本310份，根据“两对半”检测结果的不同模式分为三组：A组HBs-Ag（+）、抗-HBs（-）、HBeAg或抗-HBe（+）、抗-HBc（+）；B组HBs-Ag（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗-Hbe（+或-）、抗-HBc（+）；C组其他模式。标本经高速离心（5000g,10min），然后分别用科华公司和荣盛公司的试剂（均为ELISA法）复查抗-HBc。结果在310份标本（A组153份，

2、B组96份，C组61份）中用科华公司的试剂检测到抗-HBc阳性标本241份，用荣盛公司的试剂检测到抗-HBc阳性标本249份，二者符合率为94.8%。其中57份标本用两种试剂复查后抗-HBc均为阴性，其中A组2份，B组49份，C组6份。分别占各组的1.3%、51.0%和9.8%。结论用ELISA竞争法检测抗-HBc，由于非特异吸附和操作等原因易出现假阳性结果，尤其对于抗-HBs和抗-HBc同时阳性的标本应该复查抗-HBc。【关键词】酶联免疫吸附实验抗-HBc乙型肝炎假阳性近年来乙型肝炎血清标志检测多用酶联免疫吸附实验（ELISA）竞争法（一步法），由于方法简便，速度快而备受欢迎。但是

3、用该方法进行抗-HBc批量检测常常出现假阳性［1］。我们对310份抗-HBc阳性的标本进行了复查，现报告如下。1材料与方法1.1试剂HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc常规批量检测试剂盒均购自科华生物技术有限公司。HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg检测试剂盒为“夹心法”，抗-HBe和抗-HBc检测试剂盒为“竞争法”。抗-HBc复查试剂盒分别购于科华生物技术有限公司和上海荣盛生物技术有限公司，为“竞争法”。1.2方法常规检测：采集静脉血，在标本凝固后离心（3000g,5min），乙肝“两对半”五项指标同时批量检测，HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg、抗-HB

4、e和抗-HBc五块板条同时加入待检血清，标本全部加入约需30min，然后再加入酶标记的相应抗体，即酶标抗体的加入滞后于血清标本约30min。其余步骤严格按说明书操作。抗-HBc复查实验：每次“两对半”常规检测后，挑选抗-HBc阳性的标本，高速离心（5000g,10min），然后分别用科华生物技术有限公司和上海荣盛生物技术有限公司的试剂盒复查抗-HBc，严格按说明书操作。基本保证血清与酶结合物同时加入。1.3标本上海市吴泾医院2006年3～6月乙肝“两对半”检测标本，其中抗-HBc阳性标本310份，根据不同模式分为三组：A组HBs-Ag（+）、抗-HBs（-）、HBeAg或抗-HBbe

5、（+）、抗-HBc（+），共153份；B组HBs-Ag（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗-HBe（+或-）、抗-HBc（+），共96份；C组其他模式，61份。2结果2.1310份标本分别用两种方法复查抗-HBc的结果在310份标本（A组153份，B组96份，C组61份）中用科华公司的试剂检测到阳性标本241份，用荣盛公司的试剂检测到阳性标本249份，二者符合率为94.8%。其中57份标本用两种试剂复查后均为阴性，占18.4%。结果见表1。表1310份标本分别用两种方法表1中，两种复查实验同时阴性的标本视为常规检测中抗-HBc假阳性，假阳性率18.4%，两种复查实验结果的复

6、合率94.8%。2.2三组标本复查抗-HBc的结果在310份抗-HBc阳性标本中，A组153份，复查后2份为阴性；B组96份，复查后49份为阴性；C组61份，复查后6份为阴性。见表2。表2三组标本复查抗-HBc的结果3讨论ELISA竞争法（一步法）检测抗-HBc抗体，由于用多克隆抗-HBc和HBcAg包被反应板，加入待检标本和酶标记的单克隆抗-HBc，竞争结合HBcAg，如果酶标抗体的加入滞后于待检标本，很容易出现非特异性吸附，导致假阳性［1］。在“两对半”检测的实际操作中，如果用手工操作进行批量检测，五块板（96孔）全部加入标本约需要30min。然后再加入相应的酶标记抗体，酶标抗-

7、HBc的加入滞后于待检标本，致使标本中非特异抗体吸附到包被的HBcAg，而阻碍酶标抗-HBc的结合，出现假阳性。我们对310份抗-HBc阳性标本进行复查，结果发现57份为假阳性，假阳性率18.4%。尤其是“两对半”结果为HBsAg（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗-Hbe（+或-）、抗-HBc（+）模式的标本，抗-HBc假阳性率高达51.0%。对于抗-HBs阳性者，抗-HBc阳性与否其临床结果明显不同，因为抗-HBs和抗-HBc同时阳性可能为急