大肠腺瘤及癌组织中缺氧诱导因子

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1、大肠腺瘤及癌组织中缺氧诱导因子为探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与大肠癌组织发生、发展的关系，作者用免疫组化SABC法检测13例正常大肠黏膜、26例大肠腺瘤和50例大肠癌组织中HIF-1α的表达，并探讨其与大肠癌患者年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润转移等的联系。　　1资料与方法　　1.1一般资料　　取资料完整的大肠腺瘤26例及腺癌50例石蜡包埋标本，均经病理诊断。大肠腺癌50例中，男28例，女22例，年龄43～78(57.9±9.2)岁，其中高分化17例、中分化24例、低分化9例，DukesA11例、B11例、C18例、D10例。大肠腺瘤26例中，管状腺瘤10例、绒毛状腺瘤9例、管

2、状-绒毛状腺瘤7例。所有患者术前均未接受化疗、放疗和免疫治疗。另取13例正常大肠组织石蜡包埋标本作对照。　　1.2方法　　采用免疫组化SABC法检测HIF-1α表达，染色步骤按试剂盒说明书进行,染色前用微波进行抗原热修复10min,用PBS代替一抗作空白对照,用正常羊血清代替一抗作阴性对照,已知阳性切片作阳性对照。兔抗人HIF-1α多克隆抗体(工作浓度1∶100)和SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物公司。　　1.3结果判定　　HIF-1α蛋白以细胞胞质或胞核内有棕黄色细颗粒为阳性表达。按照zhong等［５］方法，于高倍镜下（X400）对每张切片随机选择5个视野，计数200个细胞/

3、视野，共计1000个，阳性细胞数＜1%为阴性（-），阳性细胞数1%～10%为弱阳性（+），10%～50%为中度阳性（），＞50%为强阳性（）。　　1.4统计学处理　　应用SPSS12.0统计软件，采用χ2检验或Fishers精确概率法,参数间的相关性采用Spearman等级相关分析。　　2结果　　2.1HIF-1α在正常大肠组织、大肠腺瘤及癌组织中的表达　　HIF-1α蛋白主要表达于胞浆，也有部分胞核表达(图1、2)。正常大肠组织中HIF-1α均为阴性表达，腺瘤阳性表达率为30.8%（8/26），癌组织阳性表达率为64.0%（32/50）。大肠癌组织中在肿瘤坏死明显的区域和肿瘤浸润

4、的边缘阳性表达强。腺瘤HIF-1α阳性表达率高于正常组织（χ2=7.483，Ｐ＜0.05），腺癌HIF-1α阳性表达率显著高于腺瘤（χ2=8.546，Ｐ＜0.01）。　　2.2HIF-1α表达与大肠癌临床病理关系　　见表1。表1HIF-1α表达与大肠癌临床病理特征联系（略）注：与＜60岁年龄相比，P＜0.05；与＜3cm肿瘤比，△P＜0.01；与高中分化程度比，☆P＜0.01　　肿瘤浸润至浆膜者HIF-1α阳性表达率显著高于未浸润至浆膜者（74.36%与27.27%，χ2=6.339，Ｐ<0.05）。伴淋巴结转移者HIF-1α阳性表达率显著高于无淋巴结转移者（82.14%与40

5、.91%，χ2=9.091，Ｐ<0.01）。HIF-1α阳性表达率随Dukes分期从A到D期逐渐增高，HIF-1α表达与Dukes分期相关（χ2=10.72，Ｐ＜0.05）。HIF-1α表达与患者年龄、肿瘤大小、分化程度无显著相关性(P>0.05)。　　3讨论实体肿瘤广泛存在着缺氧微环境，这主要是由于肿瘤血管结构和功能异常、微循环障碍所致的氧供减少及肿瘤细胞快速增殖氧耗增加所致。越来越多的资料显示，缺氧是肿瘤发生恶性转化甚至转移的始动因素。HIF-1α是介导细胞对缺氧微环境进行适应性反应的关键性转录调控因子［１］。HIF-1α激活后可以调节多种下游基因表达，对维持肿瘤细胞能

6、量代谢，新生血管形成、促进肿瘤侵袭和转移起重要作用［２～４］。　　大肠癌是我国位居第四位的常见恶性肿瘤，其发病率和病死率有逐年增高的趋势，但其发生机制目前尚未完全明确。目前研究表明90%大肠癌起源于腺瘤，然而腺瘤如何癌变具体机制尚不清楚。本研究观察了正常大肠组织腺瘤及不同分期大肠癌组织HIF-1α表达，结果显示，HIF-1α在正常大肠组织中无表达，在腺瘤中阳性表达率为30.8%，在癌组织中表达率为64.0%，三者之间表达率差异有显著性。HIF-1α表达水平在正常组织-腺瘤-腺癌中不断增高，这表明细胞缺氧出现在大肠癌变之前并持续到肿瘤发展的全过程，HIF-1α过表达可能是癌变过程中的早期

7、事件。部分腺瘤高表达HIF-1α，而HIF-1α通过激活多种下游基因表达，在促进腺瘤癌变中可能发挥着重要作用。由此可以设想，在腺瘤癌变早期阶段使用HIF-1α特异性拮抗可能会阻止大肠腺瘤的恶变进程。本资料还观察到，肿瘤浸润浆膜，有淋巴结转移者HIF-1α阳性表达率高于未浸润浆膜及无淋巴结转移者，且随着Dukes分期进展，HIF-1α表达率逐渐增高，表明HIF-1α在大肠癌的浸润、转移中起重要作用，HIF-1α高表达的肿瘤组织具有较强的浸润与转移