银杏叶多糖提取、纯化及其含量的测定

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1、银杏叶多糖提取、纯化及其含量的测定【摘要】目的研究银杏叶多糖的提取纯化及含量测定。方法通过对不同的提取次数、固液比及提取时间等实验，以及对粗多糖纯化的研究，确立各因素条件，采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果各因素条件为浸提温度80℃，提取时间3h，固液比1∶30，提取2次，用活性炭纯化。由此得银杏叶中粗多糖的得率为12.2%，纯化后的多糖得率为9.8%。测定提取的粗多糖中多糖含量为35.7%，纯化后的多糖含量为43.3%，多糖含量测定相对标准偏差小于3.0%。结论该方法纯化效果好，测定重现性好，得出银杏叶中多糖含量为4.3%。【关键词

2、】银杏叶多糖提取纯化多糖测定　　Abstract:ObjectiveTheextractionandpurificationmethodsforpolysaccharideinGingkoleavesined.MethodsTheconditionofeachfactorforextractionandpruificationfromtheleavesofGingkoentsofextractiontimes,differentratiosofmaterialtoextractionsolventandextractiontime.Th

3、emethodofphenol-sulfuricacidinationofthecontentofthepolysaccharide.ResultsTheconditionsofthefactorsperature80℃，extractiontime3h,materialtoextractionsolvent1:30,extraction2timesandactivatedcarbonforpurification.Raethodisefficientandstable.Thecontentofpolysaccharideingingk

4、oleavesis4.3%.　　Keyinationofpolysaccharide　　多糖又称多聚糖（polysaccharide），是构成生命活动的四大基本物质之一，不仅是机体主要供能物质，同时还具有多种多样的生物学功能，在生命活动中参与了细胞的各种活动。目前人们所知活性多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降血糖、解毒、抗辐射等功效［1～5］，其作用日益受到人们的重视。银杏(Ginkgo)是冰川时期存活在地球上的孑遗植物，素有“活化石”之称。中国是银杏的发源地，其资源占世界总量的70%左右［6，7］。目前，银杏叶制

5、剂已从单纯的药用逐步应用到食品饮料、保健品等行业，含银杏叶提取物的护发、生发、护肤等化妆品的开发也取得一定的进展。银杏叶内含有具有重要生理和药理活性作用的功能活性成分，但关于银杏叶中多糖的研究目前报道甚少，原因在于人们把精力都集中在了银杏叶中黄酮类物质的研究上［7～12］，而忽略了多糖。本实验对银杏叶中多糖提取的影响因素、纯化进行了一系列的研究，确定了提取纯化条件。同时对提取、纯化的多糖含量进行了测定，确定了银杏叶中多糖含量。这对于银杏叶的综合开发利用具有重要意义。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂恒温水浴，离心机，恒温干燥箱，真空干

6、燥箱，紫外-可见分光光度计。95%乙醇，无水乙醇，三氯甲烷均为分析纯；葡萄糖为生化试剂。　　1.2试样来源及预处理所用银杏叶样品，于200511采自大连民族学院校园内。将采得的银杏叶用自来水洗净，然后用蒸馏水清洗，淋干水后，用70℃恒温干燥箱烘干。　　1.3提取、纯化方法银杏叶多糖提取、纯化步骤如下：a)银杏叶处理：实验前用70℃恒温干燥箱将银杏叶再烘1次，然后用高速粉碎机粉碎，过80目筛，置于棕色瓶中保存。b)恒温提取：按一定固液比加水，在恒温水浴中恒温提取。c)离心：提取后用离心机以5000r/min离心20min，收集上清液，残

7、渣同前再提取1次，合并两次上清液。d)纯化：离心后得到的上清液，用活性炭纯化。e)浓缩：用真空干燥箱对纯化后的离心液进行浓缩。f)醇沉淀：加入5倍体积的95%乙醇，放入冰箱内静置24h。g)离心：对醇沉的白色絮状多糖沉淀进行离心。h)洗涤：得到的多糖用无水乙醇和三氯甲烷依次清洗后放入小烧杯中，在水浴锅中蒸干后，放入80℃烘箱中干燥。　　2结果与结论　　2.1多糖提取影响因子实验　　2.1.1固液比对粗多糖得率的影响取5份5g银杏叶样品分别放置于250ml具塞三角瓶中，按固液比1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50分别加入50，

8、100，150，200，250ml的蒸馏水，pH7，在80℃水浴中提取3h，然后离心，浓缩，用乙醇沉淀，于冰箱内静置24h后再离心，粗多糖得率见图1。由图1可见，固液比越大越好，但要进行2次提取，因此，固液