反相高效液相色谱法测定补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量论文【摘要】目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定补骨脂酊中补骨脂素(psoralen)和异补骨脂素(isopsoralen)的含量。方法以ethodsTheXTerraRP18(4.6mm×250mm，5μm)obilephaseconsistedofacetonitrile-.ResultsTheretentiontimeofpsoralenandisopsoralenangelicininand15.259minrespectively.Thecalibrationrang

2、eofpsoraleng·L-1.(r=0.9998)andthatofisopsoraleng·L-1（r=0.9999）;theaveragerecoveryethod,beingsimple,rapidandaccurate,canbeusedtoexaminethequalityofBuguzhitincture.Keym×250mm,5μm)；流动相为乙腈－水（0.28∶0.52），流速为0.8ml·min-1；,检测波长为247nm；灵敏度为2.000AUFS；柱温为35℃；进样量10μl。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于14000,

3、补骨脂素和异补骨脂素的分离度R大于1.8。2.2对照品溶液的制备分别精密称取对照品补骨脂素和异补骨脂素约20mg,各置50ml容量瓶中,加入甲醇溶解并定容至50ml,涡旋2min，即得每1ml中含补骨脂素0.44mg和异补骨脂素0.40mg的储备液，各吸取适量储备液混合稀释。2.3供试品溶液的制备精密量取补骨脂酊1ml,置50ml容量瓶中,.freelin和15.259min，无杂峰干扰测定。空白样品溶液在补骨脂素和异补骨脂素色谱位置处无吸收峰。见图1。2.5标准曲线的绘制分别精密吸取0.44g·L-1补骨脂素和0.40g·L-1异补骨脂素的对照

4、品溶液20μl、40μl、80μl、160μl、320μl，放入同一10ml容量瓶中，用乙腈分别稀释至刻度,取10μl进样,以浓度（C）对应峰面积（A）进行线性回归。补骨脂素和异补骨脂素的回归方程如下。补骨脂素：A1=－15426+102653C1，r＝0.9998，n＝5。异补骨脂：A2=－6963+98991C2，r＝0.9999，n＝5。结果表明：补骨脂素浓度在0.88～14.08mg·L-1范围内，异补骨脂素浓度在0.80～12.80mg·L-1范围内线性关系良好。图1高效液相色谱图峰1.补骨脂素；峰2.异补骨脂素2.6精密度实验分别精密

5、吸取补骨脂素和异补骨脂素的对照品溶液适量,放入同一容量瓶并用乙腈稀释至刻度，按“2.1色谱条件”重复进样5次,根据测定结果计算，浓度3.52mg·L-1和14.08mg·L-1补骨脂素的RSD分别为0.68％和0.46％；浓度3.20mg·L-1和12.8mg·L-1异补骨脂素的RSD分别为0.58％和0.41％。2.7稳定性实验取同一对照品溶液,按“2.1色谱条件”进样，分别于0、1、2、4、8、12、24h各时点进行测定，结果补骨脂素的RSD为1.37％，异补骨脂素的RSD为1.14％，表明样品溶液在24h内基本稳定。2.8加样回收率实验精密

6、吸取已知含量（批号：080124）的样品适量，分别加入不同量的对照品溶液,用乙腈稀释至刻度，每个浓度稀释2份进行测定,按“2.1色谱条件”操作，计算补骨脂素和异补骨脂素的回收率,结果见表1。表1补骨脂素和异补骨脂素的回收率2.9样品测定精密吸取供试品溶液各0.1ml,用乙腈稀释至5ml，按照“2.1色谱条件”各进10μl，以峰面积带入回归方程计算样品的含量,结果见表2。表2样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量3讨论采用反相高效液相色谱法测定补骨脂酊，曾用流动相甲醇－水（35∶65），甲醇－0.1％冰醋酸（55∶45），甲醇－0.1mol·L－1磷酸盐

7、缓冲液（55∶45）进行分离，结果有的不能完全分离，有的能分离但峰拖尾，分离效果不太理想，使用乙腈－水（0.28∶0.52）为流动相，分离结果较满意。使用反相高效液相色谱法测定补骨脂酊制剂中补骨脂素和异补骨脂素的含量,方法简便、快速、准确,可作为该制剂的质量控制方法。