水通道蛋白论文

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1、水通道蛋白论文石向群,杨金升,汪泳,包仕尧【关键词】水通道蛋白【Abstract】AIM：ToexaminethedistributionofAQP4innormalratspinalcordsoastoprovidetheoreticalbasisforfurtherstudyonitsphysiologicfunction.METHODS:ImmunohistochemicalstainingonoclonalantibodyedonspinaltissuefrozensectionsfromhealthyadultSDrats.RESULTS:Thepositivesta

2、iningcellsmostlyincludedependymalcellsofmyelocoele,glialcells,motorneurons,andepithelialcellsofspinalpiamater.Thestainingainlylocatedonthecellmembrane.Mostimportantly,itdisplayedcertaindirectivityintheglialcells,mainlyatthemembranesidecontactingainlylocatedatthemembranesidecontactingaybeinvo

3、lvedinspinaletabolism.【KeyAb，对正常SD大鼠脊髓的冰冻切片进行免疫组织化学染色,检测AQP4蛋白的表达水平.结果：免疫组织化学染色结果显示阳性着色细胞包括有胶质细胞、中央管室管膜上皮细胞、脊髓前角运动神经元、软脊膜上皮细胞，着色部位主要在细胞膜，其中在胶质细胞表现出一定的方向性,.freelAb购于深圳达科为生物技术公司（美国ADI公司的产品），其抗原决定簇为AQP4C端的17个氨基酸.浓缩型抗兔SP免疫组织化学检测试剂盒及DAB浓缩显色液购于华美生物工程公司.1.2方法1.2.1标本采集给予大鼠36g/L水合氯醛5mL过度麻醉后经心脏快速灌注冰生理

4、盐水300mL，随后经心脏灌注40g/L多聚甲醛PBS（pH7.3）300mL,先快后慢，灌注固定后经后正中切口、咬除脊突和椎弓根，取颈、胸、腰段脊髓各一小段，将大鼠脊髓置入相同固定液中后固定24h.1.2.2冰冻切片取经后固定处理好的大鼠各部分脊髓，长约5mm，置入200g/L蔗糖中，至组织块沉底后置入300g/L蔗糖中过夜，随后经OCT包埋、快速冰冻，恒冷箱切片机切片、片厚18μm，裱于经防脱片处理的清洁载玻片上，-70℃保存待用于免疫组织化学检测.1.2.3免疫组织化学检测按免疫组织化学常规步骤进行.取-70℃冰冻保存的切片，-20℃缓冲30min后置室温晾干，PBS漂洗

5、2×10min，滴加20mL/LH2O2于组织切片上，室温孵育切片10min；PBS漂洗3×10min，滴加10g/LBSA/PBS于切片上，置切片于盛有少量PBS的湿盒内37℃20min；弃去组织切片上的液体,擦干组织切片周围的载玻片，滴加兔抗大鼠AQP4mAb于组织切片上，置切片于盛有少量PBS的湿盒内，4℃过夜；PBS漂洗3×10min，每切片滴加约50μL试剂盒中的生物素化二抗，37℃湿盒中孵育60min；PBS漂洗3×10min，每切片滴加约50μL酶标链亲素，37℃湿盒中孵育30min；PBS漂洗3×10min，DAB显色液显色，镜下观察，待显色合适后以PBS清洗终

6、止显色反应.滴加10g/L苏木素复染1min，流水漂洗5min，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树脂胶封片.光镜观察结果.2结果脊髓内AQP4阳性细胞见于：脊髓中央管室管膜上皮细胞呈强阳性表达，尤其细胞膜上更加明显（Fig1）.脊髓前角运动神经元也有明显阳性着色，同样也是以细胞膜着色为主，其间的胶质细胞也表现阳性着色（Fig2）.脊髓白质内的胶质细胞、脊髓表面软脊膜上皮细胞，其中细胞的着色也主要在细胞膜上，以邻近蛛网膜下腔和面向毛细血管内皮细胞的胶质细胞表现得更加突出（Fig3）.胶质细胞和中央管室管膜上皮细胞着色具有一定的极性分布现象，前者主要分布于与毛细血管接触的一端，后者主要分

7、布在靠中央管的顶端.上述分布现象在脊髓不同节段无明显差异.3讨论从我们所发现的AQP4在脊髓中的分布情况，结合AQP4在脑内分布的相关文献［4］，可发现AQP4在脊髓中的空间分布特点主要有：①主要分布于参与脑脊液的形成与吸收的相关结构，中央管室管膜上皮细胞、软脊膜上皮细胞；②分布于参与血脑屏障形成的相关结构，胶质细胞；③分布于对细胞外间隙K+浓度敏感的神经元细胞.我们发现AQP4在胶质细胞和中央管室管膜上皮细胞上的分布表现出明显的极性现象，即AQP4主要分布于面向毛细血管内皮细胞、软脑膜和中