原位大鼠肾脏移植模型技术的改进

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1、原位大鼠肾脏移植模型技术的改进【摘要】目的：为提高大鼠肾移植模型中供体肾脏的利用率，对供肾切取、大鼠输尿管吻合方法进行改进，建立从同一供体切取双侧肾脏分别进行原位肾脏移植的方法。方法：分别切取供体的左、右侧肾脏，经肾脏动脉进行灌注；供肾的肾动脉、静脉分别与受体左侧的肾脏动、静脉血管端端吻合，并应用暂时性内支架辅助的方法进行供肾输尿管与受体输尿管上段直接吻合，同时切除受体右侧肾脏。比较左、右侧供肾受体成活率及术后并发症，并通过病理切片评价移植物的组织学变化。结果：从30个供体大鼠切取52只肾脏，分别施行左、右侧供肾肾脏移植28、24例。与常规单

2、侧供肾相比节约大鼠42%。左侧供肾组5d动物存活率89.3%(25/28)，右侧供肾组5d动物存活率91.6%(22/24)，采用左右侧供肾对受体存活率、移植物的组织学改变无明显影响。结论：这种方法能节省实验时间，减少供体的数量，符合动物实验的经济和伦理学要求。【关键词】肾脏移显微外科技术供肾切取大鼠大鼠的肾脏移植模型是进行移植免疫研究的重要工具，同时也是进行显微外科训练的经典模型，广泛应用于移植肾的急性、慢性排斥反应，肾性高血压，显微外科技术相关的实验研究。Lee[1]于1965年首先报道了制作这一模型的具体方法。近几十年来，有多种方法和改

3、进技术应用到该模型，主要目标在于减少并发症，寻找快速稳定的肾脏血管和输尿管的吻合方法［2］。国内学者也积极进行了大鼠移植模型的优化工作［34］。多数学者采用供体单侧肾脏进行移植，因右侧肾脏肾静脉较短而被弃用。本研究的目标在于建立从同一供体切取双侧肾脏分别进行大鼠肾脏移植的方法，并对输尿管吻合的方法进行改进。1材料与方法1.1材料显微外科手术器械（上海手术器械厂），手术显微镜（xts4，镇江光学仪器厂），110棉纶带线缝合针（上海医用缝合针厂），高渗枸橼酸盐嘌呤溶液（HCA离体肾保存液，上海长征医院)，SPF级雄性封闭群SD大鼠90只（

4、南京军区总医院实验动物中心提供），体质量200～300g。从30个供体切取52只肾脏，分别施行左右侧供肾原位肾脏移植28、24例，肾血管为分支动脉的肾脏不列入实验组。术前不禁食。手术在室温25℃、相对湿度60%的清洁非无菌环境中进行。10%盐酸氯胺酮注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司）和硫酸阿托品、酚妥拉明注射液、肝素钠注射液、利多卡因注射液。1.2麻醉方法10%盐酸氯胺酮注射液，15mg·(100g)-1，肌肉注射麻醉，术中注意保温。1.3外科技术从供体切取双侧肾脏，放入4℃肾脏保存液。左侧肾脏植入第1个受体，原位端端缝合肾脏动、静脉，供肾输

5、尿管与受体输尿管上端间断缝合6针。右侧肾脏翻转180°后植入第2个受体左侧肾窝，与受体的动脉、静脉、输尿管端端吻合。1.3.1供体手术取十字切口进腹，湿盐水纱布包裹肠管。仔细分离供体右侧和左侧肾脏的动、静脉血管，分别结扎肾上腺动静脉，并使肾脏的动、静脉血管骨骼化，利多卡因注射液滴于表面防止动脉痉挛。游离肾脏和输尿管，输尿管在肾脏下极处离断，保留输尿管周围的脂肪组织。在切取肾脏之前15min，通过尾静脉注射肝素100U和甲磺酸酚妥拉明注射液（1mg·kg-1）［5］。在根部结扎左肾动静脉并离断，提起肾动脉外膜，插入4号灌注针进行灌注，灌注液为4

6、℃肾脏离体灌注保存液约2ml（上海长征医院改良HCA）［6］。同法切取灌注右侧肾脏，在根部离断右肾动脉，带部分腔静脉壁剪取右肾静脉，保留右输尿管约2cm。两侧肾脏分别放入4℃HCA肾脏灌注保存液中备用。切取植入过程如图1示。1.3.2受体准备剑突下正中切口进腹，湿盐水纱布包裹肠管牵向右侧。仔细分离受体左侧肾脏的动、静脉，分别结扎肾上腺动静脉。游离肾脏，在靠近腹主动脉、腔静脉处用显微血管夹阻断左侧肾脏的动、静脉血管，尽量靠近肾门处离断左侧肾脏的动、静脉血管和输尿管。冰肝素盐水冲洗动、静脉管腔。1.3.3左侧肾脏原位移植（图2）左侧供肾置于受体的

7、左侧后腹壁肾窝，冰盐水纱布垫起并覆盖，间断滴注冰盐水保持低温，先吻合动脉，直径一般0.5到0.8mm，牵开外膜修齐动脉的末端。端端吻合动脉8～9针，两定点缝合，采用连续缝合间断打结的方法，一般前壁3针后壁3针。静脉的直径1～1.5mm，壁薄而娇嫩。180°两定点固定，端端连续缝合，开放血流后再收紧打结防止形成狭窄。先开放静脉再开放动脉。输尿管的吻合：吻合口靠近受体输尿管上端，一般需要6针间断缝合，2针对端全层牵引线，前后壁分别2针或1针。通过输尿管的蠕动波、尿液通过吻合口来判断是否漏尿。1.3.4右侧肾脏移植（图3）右侧供肾围绕其长轴旋转18

8、0°，其凸起的腹侧面靠近左侧肾窝后腹壁。因翻转后原右侧肾静脉靠近背侧，一般先吻合静脉再吻合动脉，方法同左侧供肾。右侧供肾的冷缺血时间120min。肾静脉、肾动脉、输