黄芩苷对人牙周膜细胞ranklopg表达的影响

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1、黄芩苷对人牙周膜细胞RANKLOPG表达的影响【摘要】目的研究黄芩苷对人牙周膜细胞核因子κB受体激活物配基和骨保护素(RANKLOPG)表达的影响及其作用机制。方法首先构建转化生长因子βⅡ型受体(TGFβⅡR)靶向siRNA真核表达载体，转染正常人外周血T细胞，使T细胞表面的TGFβⅡR基因沉默，继而将转染与未转染靶向性TGFβⅡR基因沉默的T细胞和正常人牙周膜成纤维细胞置于加有黄芩苷和内毒素的培养基中，分为6组：①正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+转染siRNA1的T细胞+黄芩苷;②正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+转

2、染siRNA1的T细胞;③正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+正常T细胞+黄芩苷;④正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+正常T细胞;⑤正常牙周膜成纤维细胞+黄芩苷;⑥正常牙周膜成纤维细胞。共培养48h，RTPCR检测牙周膜细胞RANKL和OPG的表达，计算RANKL/OPG比值。结果①酶切鉴定正确的克隆测序结果与设计的目的序列完全一致;②转染siRNA1的T细胞组的TGFβⅡRmRNA的表达被明显抑制;③RANKL/OPG的比值在各组间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建了TGFβⅡR靶向siRNA真核表达载体并

3、成功转染T细胞;黄芩苷可以降低牙周膜细胞表面RANKL/OPG比值;TGFβ的信号传导在黄芩苷影响牙周膜成纤维细胞表面的RANKL/OPG表达过程中起着重要作用;黄芩苷并非只通过TGFβ信号传导通路，而是亦通过其他通路对牙周膜成纤维细胞表面的RANKL/OPG进行调控。【关键词】转化生长因子βⅡ型受体;小干扰RNA;核因子κB受体激活物配基;骨保护素;牙周膜成纤维细胞　　ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectofbaicalinontheexpressionofreceptoractiva

4、torofnuclearfactorκBligand(RANKL)andosteoprotegerin(OPG)inculturedhumanperiodontalligamentcells(HPDLcells)asechanism.MethodsallinterferringRNA(siRNA)eukaryoticexpressionvectortargetedtransforminggroediumthathadbeenaddederasechainreaction(RTPCR)portantroleintheeff

5、ectofbaicalinonRANKL/OPGratioonPDLcells;④BaicalinactsnotonlythroughTGFβtoregulateRANKL/OPGinPDLcells,butalsothroughotherpathinggroallinterferingRNA(siRNA);receptoractivatorofnuclearfactorκBligand(RANKL);osteoprotegerin(OPG);periodontalligamentcells(PDLC)　骨保护素(oste

6、oprotegerin,OPG)及其配体核因子κB受体激活物配基(receptoractivatorofnuclearfactorκBligand,RANKL)是调控破骨细胞生成和活化的关键因子，在调节骨质吸收中发挥着重要作用。研究发现OPGRANKL能在人牙周膜成纤维细胞(periodontalligamentcell,PDLC)表达，并受多种因素调节[13]。在口腔局部微环境中,众多因素通过作用于牙周组织，使OPG与RANKL的浓度增加或减少来调控局部骨组织代谢。　　细菌激发的诉诸免疫炎症反应是造成和影响牙周组织

7、破坏的主要原因。黄芩苷的抗炎作用则决定了其在牙周病的防治中可能起到重要作用。有研究证实，黄芩苷、淫羊霍苷和大黄素组合时可抑制内毒素(LPS)刺激下人牙龈成纤维细胞中前列腺素E2(PGE2)的产生，亦可抑制实验性牙周炎牙槽骨吸收[4]。本研究的第一个目的，即拟通过观察黄芩苷对PDLC上OPGRANKL表达的影响，从而证实黄芩苷对牙槽骨的吸收的调节作用。　　牙周炎时，T细胞的数量、活性增高，导致炎症细胞因子分泌增加，加重牙周炎症和骨吸收。转化生长因子β(transforminggroinggroallinterferingRN

8、A,siRNA)真核表达载体，并将其转染T细胞，随后将正常PDLC与转染或未转染siRNA的T细胞置于加有内毒素和黄芩苷的培养液中，观察黄芩苷对正常PDLC上OPGRANKL表达的影响。　　1材料与方法　　1.1TGFβⅡR靶向siRNA真核表达载体的构建根据GenBank中报道的TG