黄芩苷对人外周血t细胞tcr vβ mrna表达的影响论文

《黄芩苷对人外周血t细胞tcr vβ mrna表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、黄芩苷对人外周血T细胞TCRVβmRNA表达的影响论文龚淑琪，傅颖媛，孙午，姜青龙，舒奇【摘要】目的研究黄芩苷对人外周血T细胞表面TCRVβmRNA表达的影响及其可能受体。方法采用尼龙毛柱法分离T淋巴细胞，将其分为空白对照组（T1）、黄芩苷组（T2）、抗体封闭用药组（T3）、抗体封闭对照组（T4），37℃培养48h，Trizol法提取总RNA.freelRNA表达。结果T2组较T1组TCRVβmRNA的表达明显增强（P﹤0.01）；T3组较T2组TCRVβmRNA的表达明显减低（P﹤0.01）；T3组较T4组TCRV

2、βmRNA的表达增高（P0.05）。结论黄芩苷能显著增加T细胞表面TCRVβmRNA的表达；T细胞受体（TCRαβ）是黄芩苷作用于T细胞的主要受体之一。【关键词】黄芩苷；T细胞受体；TCRVβmRNA；实时荧光RT-PCRAbstract：ObjectiveTostudytheeffectofbaicalinonthemRNAexpressionofTCRvβonthesurfaceofhumanperipheralbloodTcellsandexplorethepossiblereceptorforbaicalin

3、.MethodsTcellsnmethod,anddiuidedintofourgroups:blankcontrolgroup(T1),baicalingroup(T2),antibodyblocking4druggroup(T3)andblockingcontrolgroup(T4).Afterincubationfor48h,theTCRvβmRNAexpressionindifferentgroupsefluorescentRT-PCR.Results1.TheTCRvβexpressionofT2group

4、provetheTCRvβexpressionsignificantlyandtheTCRαβisoneofthemajorreceptorsforbaicalinKeyRNA;Real-timefluorescentRT-PCR黄芩是一种唇形科多年生草本植物的干燥根，作为药用已有上千年的历史，其味苦、性寒，具有清热解毒、凉血止血、除热安胎的功效。其主要活性成分黄芩苷（分子式C21H18O11、分子量446.35）是一种黄酮类化合物，研究发现黄芩苷具有抗病毒［1］，抗炎症［2］，抗肿瘤［3］及免疫调节的作用［4］。其

5、中对黄芩苷免疫调节机制的研究，尤其是抗病毒、抗肿瘤方面的免疫调节机制已成为学者们关注的热点问题之一，但目前的研究大多局限于细胞水平。本实验在本室既往摸索的黄芩苷最佳体外作用浓度及促进T、B细胞体外增殖研究的基础上，从黄芩苷对TCRvβmRNA表达的影响入手，结合抗体封闭技术，试图从分子水平上探索黄芩苷作用T细胞表面的可能受体。1材料与仪器1.1细胞及药品人外周血浓缩白细胞购自江西省血液中心，黄芩苷由江西省中医药研究所提供（纯度＞98%）。1.2试剂及仪器鼠抗人TCR（αβ）单克隆抗体（美国BD公司），RevertAi

6、dTMFirstStrandcDNASynthesisKit（MBI公司），Trizol试剂、SYBRGreenqPCR试剂盒（北京全式金生物技术有限公司），MyiQ实时荧光定量PCR仪（美国Bio-rad公司）。1.3qPCR引物由PrimierPrimer5.0软件设计，上海生工生物工程有限公司合成。以β-actin（β-肌动蛋白）为内参基因，序列如下：TCRvβ(XM_001716513)141bpForl。2.2实验分组按表1分组加样后转种于24孔板上，置37℃5%CO2箱培养48h。表1T细胞分组加样表（略

7、）2.3总RNA提取及鉴定①利用Trizol试剂提取总RNA。②100V、1%琼脂糖凝胶电泳观察总RNA完整性。③紫外分光光度计测定OD260/OD280，在1.80～2.0之间，说明纯度较好，并计算总RNA的浓度。2.4实时荧光定量RT-PCR以5μg总RNA为模板按试剂说明书逆转录为第一链cDNA，逆转录反应体系为20μl。qPCR反应体系为50μl：cDNA1μl、上游引物1μl、下游引物1μl、SuperMix25μl、SYBRGreenDye1μl、Mg2+2μl补足双蒸水至50μl。每个样本做3个复孔，取

8、三孔的平均值分析。qPCR扩增程序：Cycle1:(1×)95.0℃for05:00;Cycle2:(45×)95.0℃for00:15,53.0℃for00:30,72.0℃for00:30，72.0℃延升阶段收集荧光信号。循环结束后增加熔点曲线程序以观察产物特异性：Cycle3:(1×):95.0℃for01:00;Cycle4:(1×)5