复方五仁醇胶囊保肝作用的血清药理学研究论文

《复方五仁醇胶囊保肝作用的血清药理学研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、复方五仁醇胶囊保肝作用的血清药理学研究论文作者：张兵，窦志华，罗琳，达坤林，尤蝠仪，曹卫菊【摘要】目的：建立复方五仁醇胶囊血清药理学研究方法。方法：建立CCl4诱导的原代培养大鼠肝细胞损伤模型，大鼠为含药血清供体，以含药血清对损伤肝细胞增殖（MTT法）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）泄漏的影响两个指标.freelpharmacologytestingmethodforpoundaryculturehepatocytecontainingCTT),.freelinotransferase(ALT)incellculturemediumandthecontent

2、ofschisandrininserumasindices,single-factorinvestigationandmultiple-factororthogonalexperimentorplasma,andserumcontainingdruginculturesystemofdifferentconcentrationonpharmacologicaleffectandtoscreenofthepreparativemethodofserumcontainingdruganditssuitableconcentrationinculturesys

3、tem.Results：Normalratsasthedonatorofserum,usingmethanolicextractofCRESCO公司分装）；胶原酶IV（美国Sigma公司分装）；胰蛋白酶（美国Sigma公司分装）；DMEM培养基（美国GIBCO公司）；新西兰新生小牛血清（美国HyClone公司）；四氯化碳（宜兴市第二化学试剂厂）；溴化3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑蓝（MTT，AMRESCO公司）；五味子乙素（中药固体制剂制造技术国家工程研究中心）；复方五仁醇胶囊（本院自制）。1.1.3仪器HERAcellCO2培养箱（德

4、国GmbH公司）；BIO-TEK340酶标仪（美国Sigma公司）；日立7170全自动生化分析仪（日本日立公司）；Agilent1100Series高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。1.2方法1.2.1大鼠灌胃用药物的处理取复方五仁醇胶囊内容物，加0.5%CMC-Na制成混悬液。另取复方五仁醇胶囊内容物，甲醇回流提取，加0.5%CMC-Na制成混悬液。1.2.2肝细胞的分离与培养按文献1方法分离大鼠肝细胞，并以1×105/cm2接种于96孔及48孔培养板中，置CO2培养箱（5％CO2）37℃培养。1.2.3含药血清制备方法考察Ⅰ给药形式及剂量考察

5、取SD大鼠20只，随机分成5组（制剂原形组，提取物小剂量、中剂量、大剂量组和空白组），每组4只，禁食12h。制剂原组组每天按照成人临床等效剂量的10倍分两次灌胃制剂混悬液，提取物小剂量、中剂量和大剂量组同法分别灌胃5、10和20的提取物混悬液，连续给药3天，末次给药后1h颈总动脉取血，4℃过夜，分离血清，空白组每天0.5%CMC-Na灌胃，同法制备空白血清。取培养24小时的肝细胞，吸弃上清液，随机分成6组（正常对照组，模型对照组，制剂原形组，提取物小剂量、中剂量、大剂量组），每组设6个复孔。除正常对照组外，每孔加入含CCl4的DMEM及相应含药血清（模型

6、对照组为空白血清），CCl4和血清的终浓度分别为10mmol/L和10％，正常组相应加入DMEM培养液和空白血清。作用24h后，收集48孔板中培养上清液检测ALT。96孔板中每孔加入5mg/ml的MTT液20μl，继续孵育4h，每孔再加入DMSO200μl，振荡后，用酶标仪于波长570nm测吸光值A。1.2.4含药血清制备方法考察Ⅱ其他条件的正交试验考察以动物是否造模、给药间隔时间、取血时间、取血成分为考察因素，每个因素设2个水平（见表1），选用L8(27)正交表安排试验。取SD大鼠32只，随机分成8组，每组4只，其中肝损伤模型大鼠给药前24h腹腔注射C

7、Cl41.0ml/kg。各组每天按照成人临床等效剂量的10倍分两次灌胃提取物混悬液，末次颈总动脉取血，血浆组血液立即离心分离血浆，血清组血液4℃过夜，分离血清。取培养24h的肝细胞，吸弃上清液，随机分成8组，分别用以上制得的含药血清（血浆）按1.2.3相应方法处理，测定ALT及吸光值A。按文献方法2制备对照品及含药血清（血浆）供试品溶液，注入液相色谱仪，测定五味子乙素含量。1.2.5体系中含药血清添加量考察取培养24h的肝细胞，弃上清液，随机分成6组（正常对照组，模型对照组，5%、10%、20%、40%含药血清组），每组设6个复孔。模型对照组和各含药血清

8、组更换为加入CCl410mmol/L的DMEM培养液，正常对照组相应加入DMEM