桃核承气汤对蓄血证大鼠血管mmp2,timp2基因表达的影响

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1、桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2,TIMP2基因表达的影响【摘要】［目的］观察桃核承气汤对蓄血证大鼠血管基质金属蛋白酶2(MatrixMetalloprotEinase2，MMP2)及金属蛋白酶2组织抑制剂(TissueInhibitorofMetalloprotEInase2，TIMP2)基因表达的影响，探讨此方的作用机制。［方法］半定量RT－PCR检测各组大鼠颈总动脉匀浆中MMP2、TIMP2基因的表达，进行分析。［结果］与模型组相比,药物组减少了MMP2基因的表达，增加了TIMP2的表达(P<0.01)。［结论］桃核承气汤能改变蓄血证大鼠动脉壁MMP2、

2、TIMP2基因的表达，这可能是其主要作用机制之一。【关键词】桃核承气汤；蓄血证；基质金属蛋白酶2；金属蛋白酶2组织抑制剂　　Abstract：［Objective］ToinvestigatetheeffectsofTaohechengqitang(THCQT)onthegeneexpressionofMatrixMetalloproteinase2(MMP2)andTissueInhibitorofMetalloproteinase2(TIMP2)inarteryvesselofXuxuezhengrats.［Methods］Halfquantitativereversetran

3、scriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)odelgroup，MMP2geneexpressionlevelsintheTHCQTgroupayaccountfortheeffects.　　Keya公司产品，用生理盐水配成20μg/ml的溶液。药液制备：桃仁∶大黄∶桂枝∶芒硝∶甘草=2∶2∶1∶1∶1（中药饮片由浙江中医药大学门诊部提供），适量水煎，头煎20min，二煎30min，分别滤取药液，合并两次药液，在60℃恒温条件下浓缩成每ml含生药1g的药液备用。主要试剂：Trizolreagent,美国Invitrogen公司产品；反转录试剂盒(Rever

4、seTranscriptionSystem)，美国Promega公司；TaqDNA聚合酶，Takara公司；βactin引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。主要仪器：台式高速冷冻离心机，德国Heraeus公司；PCR仪，TECHNE；紫外分析仪，ZF－1型，上海嘉鹏科技公司；电泳仪，DYY－8B型稳压稳流电泳仪；核酸蛋白仪，AmershamBiosciences。　　1.2方法将30只大鼠按随机数字表法分成空白对照组(control)、模型组(model)、药物组(THCQT)3组，每组10只。造模方法参考　　3讨论　　MMPs是一类Zn2+依赖性内肽酶，在降解各种细胞外基质(Extra

5、cellularMatrix,ECM)中起着重要的作用，也因此对组织器官发育、创伤愈合、血管新生、骨的生成、巨噬细胞游走等生理过程都有着重要的影响；在许多病理状态下，MMPs表达的增加与活性增高进而导致ECM的变化可以引起组织的损伤，许多疾病和其有着密切的关系，如肿瘤细胞周围的ECM降解是肿瘤细胞发生浸润、转移的必要步骤。MMP2又名明胶酶A（GelatinaseA），属于MMPs家族中的明胶酶类，主要作用是降解IV型胶原和明胶。实验证实肝癌［3］、食管癌［4］、宫颈癌［5］、肾癌［6］等各种肿瘤疾病中均可以发现MMP2的显著高表达。TIMP2是MMP2的天然抑制物，是抑制MMPs活性

6、的多功能因子家族中的成员，MMP2和TIMP2两者基因表达水平的变化，对诸多疾病的形成、发展与预后都有着相当大的影响。除了肿瘤，还有诸如肝纤维化［7］、心血管病［8］等严重危害人民健康的疾病的进展中，两者也都起着相当大的甚至关键的作用。MMPs抑制剂类药物的研究开发是当前对肿瘤等疾病的防治的研究热点之一。现代中医药研究已经证实相当多的中药可以对MMP2，TIMP2进行有效干涉。　　“蓄血证”出自《伤寒论》，广泛用于诸多种存在热瘀之象的内伤疾病的病机分析。有学者认为，心血管病、肿瘤等疾病的一些发展阶段与中医的蓄血证类似［9］。如有效地治疗糖尿病肾病［10］、急性脑出血［11］等各科疾病；

7、而实验研究也表明其有抗肿瘤［12］等作用。　　本实验结果显示蓄血证造模可使大鼠的MMP2基因的表达明显增加，TIMP2基因的表达明显减少，提示中医的蓄血证涉及到MMPs的改变，而后者引起的组织的损伤可能是蓄血证病理变化的重要因素；联系前述的MMPs与肿瘤的关系，有关肿瘤等疾病的发展过程中可以出现类似蓄血证病变的论断在一定程度上得以证实，由此可能可以运用蓄血证理论对肿瘤等疑难重症进行及早而有效的