加味桃核承气汤对肝纤维化大鼠tgfβ1蛋白表达的影响

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1、加味桃核承气汤对肝纤维化大鼠TGFβ1蛋白表达的影响：赵治友邬亚军张俊杰林庚庭周庚生汪国运【摘要】[目的]观察加味桃核承气汤对四氯化碳肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白表达的影响。[方法]用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，研究分组为正常对照组、模型对照组、加味桃核承气汤高、中、低剂量治疗组和秋水仙碱对照组;灌胃给药，疗程8周;用免疫组化技术检测肝组织TGFβ1的蛋白表达;检测血清ALT、AST水平;用苦味酸天狼红胶原染色方法进行半定量肝纤维化计分(SSS)。[结果]高、中、低剂量组及秋水仙碱组的TGFβ

2、1的表达水平均低于模型对照组;经加味桃核承气汤治疗后血清ALT、AST水平及肝纤维化SSS计分显著下降。[结论]加味桃核承气汤可抑制肝纤维化大鼠TGFβ1的表达，达到抗肝纤维化作用。【关键词】加味桃核承气汤;四氯化碳;大鼠;肝纤维化　　Abstract：[Objective]TostudytheeffectsofTGFβ1ofJiaodelsentalratsalcontrolgroup，modelcontrolgroup，colchicinepositivetreatmentgroup，highdose，mediumdo

3、se，loentgroups.Drugsinistration.Proteinexpressionlevelsoftransfergroinedmunohistochemicalstainingmethod.Scoresofhepaticfibrosisiquantitivescoringsystem(SSS)throughtianlanghongstaining.[Results]TheproteinexpressionlevelsofTGFβ1inthelivertissuesinmodelcontrolgrouparked

4、lyincreasedparedalcontrolgroup.ScoresofhepaticfibrosisandthelevelsofserumALTandASTinmodelcontrolgroupalcontrolgroup，butloentgroupsodelcontrolgroupandthreejiaentgroups.[Conclusion]Jiaa公司。兔抗鼠TGFβ1单克隆抗体：武汉博士德公司，二抗：美国Zymed公司;(4)主要仪器：切片机：德国Leca;生物显微镜：日本OLYMPUSCHK;高清晰度彩色病理

5、图文报告分析系统：武汉同济医科大学;电子天平：上海第二天平衡器厂。　　1.2方法　　1.2.1模型复制方法[1]将CCl4与橄榄油以4∶6(体积比)配成40%油剂，首剂按0.5ml/100g体重腹腔注射，以后按0.3ml/100g体重腹腔注射，2次/周，第4周末，大鼠中期肝纤维化形成并开始治疗，治疗期间继续CCl4腹腔注射，以维持病因刺激至第12周末。　　1.2.2分组造模过程共死亡8只大鼠，将余下的132只大鼠肝纤维化模型随机分为加味桃核承气汤低剂量组27只、加味桃核承气汤中剂量组27只、加味桃核承气汤高剂量组26只、秋水仙碱组

6、26只、模型对照组26只;造模前设有正常对照组10只。共6组。　　1.2.3给药方法于第4周末开始给药。加味桃核承气汤低、中、高剂量组分别按每100g体重0.25ml、0.5ml、1.0ml的剂量灌胃给药;秋水仙碱组按每kg体重0.1mg的剂量，秋水仙碱用生理盐水溶解后灌胃;模型对照组、正常对照组以同体积生理盐水灌胃。疗程均为每天1次，连用8周。　　1.2.4标本的提取方法治疗8周后，股动脉取血作肝功能指标检测;取肝组织用10%福尔马林固定，用作组织病理学观察。　　1.2.5观察指标(1)一般情况：观察大鼠精神、食欲、毛色、二便及

7、舌质的变化，观察肝脏质地。(2)肝功能指标血清ALT、AST测定：日本岛津7200型全自动生化分析仪测定。(3)肝组织病理学观察：肝组织经石蜡包埋、切片，作HE染色、苦味酸-天狼红胶原染色，观察肝细胞变性、纤维组织增生情况。按2000年全国肝炎防治会议制定的标准(2000标准)观察肝纤维化变化情况[2]，再按肝纤维化组织半定量计分系统(SSS)计分[3]。(4)肝组织TGFβ1的蛋白表达，采用免疫组织化学染色法。肝组织经石蜡包埋、切片、二甲苯脱蜡、乙醇水化;PBS液洗5min，共3次;3%H2O2室温孵育30min;PBS液洗3

8、次，5min/次;加抗TGFβ1抗体，湿盒内置37℃孵箱内2h;PBS液洗3次，5min/次;加二抗，37℃孵箱内置1h;PBS液洗3次，5min/次;DAB显色10min;流水终止反应3min;苏木素复染3min;流水洗1min;1%盐酸酒精分