胎盘贴壁细胞的生物学特性论文

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1、胎盘贴壁细胞的生物学特性论文【关键词】胎盘；贴壁细胞；干细胞Biologicalcharacteristicsofplacentaderivedadherentcells【Abstract】AIM:Toisolateandculturehumanplacentaderivedadherentcells(hPDAC)invitroandstudytheirbiologicalcharacteristicsinvolvingmorphology,phenotypeanddifferentiation.METHODS:MononuclearcellsL/LFBS.Their

2、surfacemarkersetry;thegroade;cellsof3passagesinC,dexamethasoneandsodiumβglycerophosphate,andtheinducedcellsatrixmineralizationethasoneandinsulin,andtheinducedcellseasfibroblasts,andadherentcellsmineralizationandafter7d,.freeledtohavetheosteogenicandadipogenicpotentials,indicatingthatthe

3、ycouldberegardedasanalternativesourceofstemcells.【Keycells【摘要】目的：通过体外分离和培养胎盘贴壁细胞，以研究其形态、表型和分化特点.方法：采用IV型胶原酶消化人胎盘组织，获得单个核细胞，接种于100mL/LFBS低糖DMEM培养基中，贴壁后常规换液、传代，流式细胞仪检测其表面标志，绘制生长曲线.采用β甘油磷酸钠、维生素C、地塞米松联合诱导，使胎盘贴壁细胞分化为成骨细胞.freelarroalcell,MSC）主要来源于骨髓，可以分化为多种组织细胞：成骨、软骨、脂肪、神经细胞等，但随着年龄增长或合并感染、肿瘤等

4、疾病时骨髓干细胞的分化能力明显下降，因此寻找新的干细胞成为当务之急.近几年来有学者发现胎盘组织中存在MSC.为进一步证实这一发现，我们从胎盘中提取贴壁细胞，观察其生物学特性，以探讨其是否具有干细胞特性.1材料和方法1.1材料足月剖宫产的胎盘（产妇同意），低糖DMEM（Gibco公司），新生牛血清（FBS，Gibco公司），IV型胶原酶（Sigma公司），胰蛋白酶（Sigma公司），鼠抗人单克隆抗体CD19，CD44，CD45，CD105，CD34，CD29（晶美公司），茜素红（Sigma），油红O（Sigma），倒置显微镜（Olympas），CO2培养箱（Jouan）

5、.1.2方法1.2.1胎盘贴壁细胞的分离和培养取足月剖宫产胎盘，剪取胎儿侧胎盘组织，PBS反复冲洗，剪成碎块，以1g/LIV型胶原酶37℃消化30min，取上清液，以800r/min离心5min，沉淀物重复消化，收集每次离心后的细胞沉淀，PBS冲洗2遍，以1×107/L的密度接种于100mL/LFBSDMEM培养基中，贴壁后3~5d换液1次，取传3代以上细胞备用.1.2.2胎盘贴壁细胞的表型测定取第3代细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化3min，100mL/LFBS终止消化，PBS冲洗2遍，调整细胞数为1×104/μL，分别加入鼠抗人单克隆抗体CD19,CD44,CD4

6、5,CD105,CD34，流式细胞仪检测细胞表型.1.2.3生长曲线的绘制取第3代细胞，以2×107/L的密度接种于12孔板中，每日取3复孔，台盼蓝染色计数活细胞，连续培养计数7d，计算平均值，绘制生长曲线.1.2.4细胞周期测定取第3代细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化3min，10mol/LFBS终止消化，PBS冲洗2遍，调整细胞数为1×106/L，流式细胞仪检测细胞周期.1.2.5细胞诱导分化及染色取第3代胎盘细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化3min,10mol/LFBS终止消化，800r/min离心5min，PBS冲洗3遍，分为4组分别以1×105/L细胞数接种

7、于6孔板中，1组加入成骨诱导剂（20mmol/Lβ甘油磷酸钠、50mg/L维生素C，10mmol/L地塞米松，100mL/L新生牛血清DMEM培养基），2组加入脂肪诱导剂（10mmol/L地塞米松、10mg/L胰岛素、100mL/L新生牛血清DMEM培养基），3,4组为对照组，采用100mL/L新生牛血清DMEM培养基培养，置37℃，50mL/LCO2孵箱培养，每3~5日换液1次.取培养10d后的1，3组细胞，倒掉培养液，多聚甲醛固定30min，PBS冲洗3遍，茜素红染色8h，显微镜下观察阳性结果.取培养7d后的2，4组细胞，多聚甲醛固定后油红O染色