rhd 1227a等位基因在rh阴性人群和随机人群中的频率研究论文

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1、RHD1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率研究论文吴俊杰洪小珍许先国马开荣朱发明严力行【摘要】本研究调查RHD1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率。采用等位基因特异-聚合酶链反应(allelespecific-polymerasechainreaction,AS-PCR)检测RHD1227A等位基因，RHD基因拷贝数采用D杂合性试验和RHD外显子9的核苷酸序列分析方法进行确定。结果表明：在143例Rh阴性献血员中，共检测到41例RHD1227A等位基因携带者，其中8例(19.51%)为RhCCdee

2、，32例(78.05%)为RhCcdee，1例(2.44%)为RhCcdEe。在这41例RHD1227A等位基因携带者中，35例有RHD基因的缺失，另外的6例是RHD1227A等位基因的纯合子。在489例随机献血员中检测到7例RHD1227A等位基因先证者.freelongRhNegativePopulationandRandomPopulationAbstractToinvestigatethefrequencyofRHD1227AalleleinRhnegativepopulationandrandompopulation

3、,anAS-PCR(allelespecific-polymerasechainreaction)methodloyedtodetectRHD1227Aallele.RHDgenecopyinedbyDzygositytestandRHDexon9nucleotidesequenceanalysis.Theresultsshoong143Rhnegativedonors,forty-oneRHD1227Aallelecarriersainingcarriersozygous.Seven(1.43%)individualsong

4、489randomdonors.TheyalRhpositivephenotype.ItisconcludedthatthefrequencyofRHD1227Aalleleis16.43％amongRhnegativepopulationand0.72%amongtherandompopulation.Keyerasechainreaction,AS-PCR)方法调查DEL表型的主要等位基因RHD1227A在Rh阴性人群和随机人群中的频率，并对结果的临床意义作了讨论。材料和方法对象在2003年10月—2004年10月期间在浙

5、江省血液中心献血的无亲缘关系Rh阴性献血员143名作为Rh阴性人群，随机选取在浙江省居住或者工作的无亲缘关系献血员489名作为随机人群。Rh表型血清学鉴定RHD表型鉴定采用常规盐水平板法，使用加拿大Dominion公司的IgM和IgG混合的抗D试剂（人单克隆IgM抗D,D175-2细胞株；人单克隆IgG抗D，D4151E4细胞株）。RhC、Rhc、RhE和Rhe鉴定采用盐水试管法，试剂为Dominion公司的相应单克隆抗体。AS-PCR参照文献［10］进行。用特异扩增RHD1227A等位基因的引物：RHDEL－s（上游引物）:

6、GACCAAGTTTTCTGGAAA（位置对应于AJ299028的68-85）、RHDEL－a（下游引物）:CGAGAGAATTTTGAGCAC（位置对应于AB035185的849-832）。一对特异扩增人生长激素（HGH）基因429bp的引物作为内对照，HGH-s（上游引物）：GCCTTCCCAACCATTCCCTTA；HGH-a（下游引物）：TCACGGATTTCTGTTGTGTTT。反应总体积10μl，含模板DNA0.2μl（约含DNA20-50ng），特异性引物终浓度250nmol/L，内对照引物终浓度50nmol/L

7、，MgCl2终浓度1.5mmol/L，dNTP终浓度200mmol/L，Taq酶0.2U（TaKaRa公司产品）。PCR扩增条件：95℃预变性5分钟，然后94℃变性30秒、58℃退火30秒和72℃延伸50秒，循环30次，最后72℃延伸5分钟。产物通过2％琼脂糖电泳，用凝胶成像仪（Syngene公司产品）观察结果。RHD基因外显子9序列分析参照文献［11］进行。用RHD基因外显子9的特异引物，377测序仪进行PAGE电泳，SequenceAnalysis进行数据分析。RHD基因缺失检测根据Perco等［12］的方法，用特异性引物

8、μ1-s（上游引物）和rnb31（下游引物）PCR检测Rhesushybridbox（AJ252313,4988-7710区域）。如果可以扩增得到2778bp的特异性片段，则表明存在Rhesushybridbox，有RHD基因的缺失；反之，则不存在Rhesushybridbo