增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞株的表达

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1、增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞株的表达作者：高峰，田玉科，杨辉，安珂，张传汉【关键词】增强　　GeneexpressionofenhancedgreenfluorescentprotEininimmortalizedneuralprogenitorcellsstrainofrat　　【Abstract】AIM:TostudythetransfectionefficiencyandtheexpressionofenhancedgreenfluorescentprotEIn（eGFP）inimmortalizedneuralprogenitorcells（INPCs）media

2、tedbyrebinantadenoassociatedvirus（rAAV）.METHODS:TheviralvectorofrAAVcontainingeGFPeasured.Antinestinantibodiesandsimianvirus40largeTantigengene(SV40Tag)antibodiesolecularmarkersofneuronsandastrocytesmunocytochemistrymethodtoinvestigatethecapabilityofdifferentiationofthetransfectedcellsafterbeingin

3、ducedby50mL/Lfetalbovineserum.RESULTS:EGFPexpressionberofeGFPpositivecellsreachedabout90%after72h.Afterbeingculturedfor8edasnestinpositiveandSV40Tagpositivecellsmunocytochemistryandcouldbedifferentiatedintoneuronsandastrocytesbytheinductionoffetalbovineserum.CONCLUSION:TheviralvectorofrAAVcontaini

4、ngeGFPcanbehighlytransfectedintoINPCsandthetransfectedcellsshoeGFPexpressioninvitro.EGFPcanbeavaluabletrackingtoolforthestudyofneuralprogenitorcelltransplantation.　　【KeyL/L胎牛血清诱导细胞分化后，应用神经元和星形胶质细胞特异性标志物抗体检测其分化能力.结果：荧光显微镜观察显示转染后24h神经前体细胞即有绿色荧光蛋白表达，转染后72h，大部分细胞表达绿色荧光蛋白，转染效率可达90%.经传代培养8L/L胎牛血清可诱导其分化为

5、神经元和星形胶质细胞.结论：携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺相关病毒可高效转染永生化大鼠神经前体细胞，并可在细胞中长期稳定地表达，绿色荧光蛋白作为良好的示踪剂可应用于神经前体细胞的体内移植.　　【关键词】神经前体细胞；重组腺相关病毒；绿色荧光蛋白；基因转染　　0引言　　神经前体细胞（neuralprogenitorcell,NPC）是一类可以分裂增殖、自我更新并具有多分化潜能的细胞［1］.它可以作为神经细胞的种子细胞，在细胞移植治疗和细胞介导的基因治疗中具有潜在的临床应用价值［2-3］.永生化神经前体细胞（immortalizedneuralprogenitorcell,INPC）在体外

6、培养中能够自我更新和无限扩增，可以为细胞移植提供大量表型、基因型稳定的NPC［4］.我们将重组腺相关病毒（rebinantadenoassociatedviral,rAAV）载体介导的增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,eGFP）基因转染入大鼠INPC，并观察GFP的表达情况，以探讨eGFP作为细胞示踪标记的可行性，为今后INPC应用于体内移植奠定基础.　　1材料和方法　　1.1材料　　基础培养基Neurobasal（GIBCO公司）；胎牛血清（Hyclone公司）；碱性成纤维生长因子（basicfibroblastgroalgroianvi

7、rus40largeTantigengene,SV40Tag）抗体、微管相关蛋白（microtubuleassociatedprotein2,MAP2）抗体和胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillaryacidicprotein,GFAP）抗体（NeoMarkers公司）；DAB免疫组化试剂盒（北京中山公司）.　　1.2方法　　①细胞培养：SV40Tag转染原代大鼠NPC后建立的INPC株由本研究室构建［5］并保存.