甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用论文

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1、甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用论文张建军李洪源王吉锡李鑫朴英爱陈振华谢志平杨庆伟【摘要】目的研究甘草抗病毒活性成分(GX)体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用。方法采用中性红实验和观察细胞病变(CPE)法，以利巴韦林为阳性药,测定GX对RSV的抑制作用。结果GX的半数中毒浓度（TC50）为460.00?μg/ml，半数有效抑制浓度(EC50)为23.53?μg/ml，治疗指数(TI)为19.55;GX在RSV感染Hela细胞2，4，6，8，10?h后给药,对RSV复制均有明显的抑制作用(P0.

2、01)；且GX对RSV有中和作用。结论GX在体外对RSV复制有明显的抑制作用。【关键词】甘草；呼吸道合胞病毒；抗病毒作用呼吸道合胞病毒（RSV）是一个世界范围内婴幼儿最常见的呼吸道感染的病原体。目前.freell。本次实验采用100TCID50/0.2?ml的感染量。硅胶制备板(安徽良臣硅源材料厂)。甲醇、三氯甲烷、无水乙醇等，均为分析纯(天津市博迪化工有限公司)。中性红(上海华舜生物工程有限公司)，用磷酸盐缓冲液稀释。脱色液：由无水乙醇、枸橼酸钠和盐酸组成。12方法121甘草抗病毒活性成

3、分（GX）的制备甘草经水煎煮浸提、醇沉、大孔吸附树脂柱层析得到的GC314,再经由氯仿和甲醇组成的展开剂，在硅胶板上经薄层层析得GX。122药物毒性实验用细胞维持液将GX和利巴韦林释为7个浓度组，分别加入到Hela细胞已长成单层的96孔培养板上。同时设正常细胞对照组。置35℃、5%CO2培养箱培养3?d后，弃去维持液,每孔添加0.2?ml中性红染液,放回培养箱培养2?h。取出后用磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次,添加0.2?ml脱色液。室温暗处放置30?min后,酶标仪450?nm波长下测吸

4、光度(A)值〔4〕，测定细胞存活率，求药物半数中毒浓度(TC50)。细胞存活率=药物组平均A值/细胞对照组平均A值×100%。123药物抗RSV实验参照文献〔5〕。实验分3组进行。(1)药物的抑制作用：在96孔板上，接种100TCID50/0.2?mlRSV液，0.2?ml/孔。吸附2?h后，分别加入不同浓度的GX和利巴韦林。置培养箱中培养。同时设正常细胞对照组和病毒对照组，待病毒对照组细胞病变(CPE)为4时，中性红实验同上,测定病毒抑制率，求药物的半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI

5、)。病毒抑制率=［实验组(药物+病毒)平均A值-病毒对照组平均A值］/［正常细胞对照组平均A值-病毒对照组平均A值］×100%。CPE记录规则：0为细胞无CPE；1为0～25%CPE；2为25%～50%CPE；3为50%～75%CPE；4为75%～100%CPE。TI=TC50/EC50。(2)不同时间给药对RSV抑制作用：向96孔板中，加入100TCID50/0.2?mlRSV液，0.2?ml/孔，分别作用2，4，6，8，10，12?h后吸弃病毒液，再分别加入GX（浓度为120.00?μg/m

6、l）和利巴韦林（浓度为80.00?μg/ml），培养方法同上。待病毒对照组CPE为4时，记录CPE结果。(3)药物的中和作用：200TCID50/0.2?mlRSV液与含不同浓度药物的维持液等体积混合，35℃作用2?h后,加到96孔板中，0.2?ml/孔。吸附2?h，弃上清，加细胞维持液，置培养箱中培养。待病毒对照组CPE为4时，记录CPE结果。13统计分析采用SAS?82软件进行分析。利用ReedMuench法测定病毒TCID50，Logit回归计算药物TC50和EC50〔6〕。不同时间

7、处理组或不同剂量组与病毒对照组之间的结果比较采用Kruskal-edSaoPaulo,2001,56(3):79-90.〔2〕朱丹,刘华刚.抗病毒中药的最新研究进展［J］.中国医学文摘：内科学，2005，26(6)：747-748.〔3〕刘鑫妍，李洪源，王秀琴，等.甘草抗病毒有效部位(GC3-1-4)体外抑制呼吸道合胞病毒的研究［J］.中医药信息，2006，23（4）：65-67.〔4〕MarkRP,DaleLB,PaulFT.Potentinhibitionofrespiratorysyncy

8、tialvirusreplicationusinga2-5A-antisensechimeratargetedtosignalsicRNA［J］.ProcNatlAcadSciUSA，1998,95(15):8874-8879.〔5〕何静，杨占秋，石丽桥，等.盐酸阿比朵尔抗呼吸道合胞病毒机制初探［J］.武汉大学学报：医学版,2006,27(1)：69-71.〔6〕刘昌孝，孙瑞元.药物评价实验设计与统计学基础［M］.北京:军事医学科学出版社，1999：31-32.〔7〕JeffreyIC.Lick