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《黄芩苷抗呼吸道合胞病毒感染作用的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、黄芩苷抗呼吸道合胞病毒感染作用的体外研究作者：张丽亚董琳陈小芳王平【摘要】目的探讨黄芩苷（baicalin）的体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染作用及最佳浓度。方法应用微量细胞培养技术，观察RSV感染人喉癌（Hep-2）细胞病变效应（CPE）。观察不同浓度黄芩苷对人肺癌腺上皮（A549）细胞的CPE及RSV感染后CPE的抑制作用。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测黄芩苷对A549细胞的毒性作用和RSV感染后细胞存活率的影响。结果黄芩苷浓度≤0.156mg/ml时，A549细胞未显示明显CPE，MTT比色法结果与CPE观察结果相符；浓度在0.078～1.2
2、5mg/ml时，RSV感染的A549细胞仅出现轻微CPE，0.625mg/ml时对CPE有最好的保护作用；治疗指数（TI）为19.23；MTT比色法也显示以上浓度范围黄芩苷组的细胞存活率明显高于RSV感染组，差异有统计学意义(P均<0.05)，其中以0.3125mg/ml组的细胞存活率最高，达82.09%。结论黄芩苷具有体外抗RSV感染作用，有效浓度为0.078～1.25mg/ml，最佳作用浓度为0.156mg/ml。【关键词】黄芩苷呼吸道合胞病毒抗感染体外实验【Abstract】ObjectivesTosearchtheeffectofbaicali
3、nforinfectionofrespiratorysyncytialvirus（RSV）andthebesteffectiveconcentration.MethodsMicro-icroscopically.TheCPEofA549cellsinducedbybaicalinofdifferentconcentrationandtheeffectsofbaicalinonchangeofCPEofA549cellsinducedbyRSVinfectionicroscopically,too.Methylthiazolyltetrazolium(MTT)
4、assayalA549cellsandprotectiveeffectsofitonRSVinfectedA549cells.ResultsTT）购自美国Amresco，FBS为四季青公司产品，RPMI-1640培养液和0.25%胰酶均为GIBCO公司产品。细胞生长液为10%FBS的RPMI-1640培养液,内含100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素,细胞维持液除FBS含量为2%外,其它成分同细胞生长液。1.2方法(1)人肺癌腺上皮(A549)和Hep-2细胞培养：细胞以1×105/ml浓度接种于25cm2培养瓶中,置于37℃,5%CO2培养箱培养,每
5、隔2d换液,待细胞长至80%融合状态时用于实验。(2)RSV增殖：将冻存的病毒株复苏后接种于对数生长期Hep-2细胞上,于2～5d出现细胞病变,待病变达100%时收获病毒,置-20℃≥2h，37℃反复冻融3次。3000转/min离心10min，弃沉淀，收集病毒上清，即为备用的病毒原液，分装后于-80℃保存。(3)RSV半数感染量（TCID50）的测定:Hep-2细胞以1×105/ml浓度接种96孔培养板，每孔100μl。病毒原液用维持液10倍系列稀释9个浓度。细胞长成单层时吸弃培养液，D-Hanks液洗2次，接种各稀释度的病毒液，每个浓度6个复孔，每孔50μ
6、l。并设正常细胞对照组。置33℃、CO2培养箱中吸附2h后吸弃上清液，每孔加维持液100μl，置培养箱中继续培养。逐日观察细胞病变效应(CPE)并记录，连续观察7d，用Reed-Muench公式［７］计算病毒TCID50。本实验采用病毒滴度为TCID50:10-7.7/50μl。(4)黄芩苷对细胞的毒性测定(即药物的无毒限量测定)：将成层良好的A549细胞经消化成单个细胞,用生长液调整细胞数至1×105/ml,按0.1ml/孔加入96孔微量细胞培养板中,48h后形成单层细胞备用。用D-Hanks液清洗2次后加入维持液递倍稀释（1：2、1：4、1：8、1：16
7、、1：32、1：64、1：128、1：256）后的黄芩苷，每个浓度6个复孔，每孔100μl，并设正常细胞对照。置37℃、5%CO2培养箱中培养，观察细胞融合、坏死、脱落、漂浮、死亡等CPE，表示为［８］:0％～25%(+),25%～50%(++),50%～75%(+++),75%～100%(++++)，采用Reed-Muench法［９］计算CPE不再进展时(约72h)黄芩苷对A549细胞的半数中毒浓度（TD50）。然后每孔加入10μlMTT溶液(5mg/ml),继续培养4h,倒置显微镜下观察MTT结晶状况,然后弃去孔内上清液,每孔内加入150μl二甲基亚砜,
8、低速振荡10min后,在酶联仪A490nm下测定光密
