高效液相色谱法测定灵芝孢子粉软胶囊中多糖含量的研究

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1、高效液相色谱法测定灵芝孢子粉软胶囊中多糖含量的研究【摘要】目的建立灵芝孢子粉软胶囊中多糖含量的HPLC测定方法。方法采用ShodexSH1011(苯乙烯二乙烯苯共聚物键合磺酸基)糖柱，流动相0.6%硫酸溶液，检测波长200nm。结果灵芝多糖在0.266～8.51mg/ml范围内线性关系良好，r=0.9998，平均加样回收率为100.4%（n=9），RSD=1.57%。结论该方法简便快捷，无干扰，重复性好，可用于灵芝孢子粉软胶囊的质量控制。【关键词】灵芝孢子粉软胶囊灵芝多糖高效液相色谱　　ContentDetermina

2、tionofPolysaccharidesofGandermaluciduminSporePoethodfordeterminationofGanodermalucidumPolysaccharideinsporepon.ResultsThelinearrelationshipoftheconcentrationsandpeakareasg/ml(r=0.9998).Theaveragerecoveryethodissimple,rapidandaccurateandcanbeusedforqualitycontrol

3、ofthecapsule.　　Keyalucidumgandermacapsule;Polysaccharides;HPLC灵芝孢子粉软胶囊是由灵芝孢子粉胶囊［m×300mm,6μm),流动相：硫酸水（6∶1000），检测波长200nm,流速0.6ml/min,进样量20μl,柱温30℃。在上述色谱条件下，D无水葡萄糖的保留时间为4.987min。　　2.2供试品溶液与对照品溶液的制备　　取本品10粒内容物混合均匀，取约3.0g，精密称定，置于10ml玻璃离心管中，加正己烷8ml,震荡2min后，离心（3000r/

4、min）10min，弃去正己烷层，再重复上述步骤一次，水浴挥去残留正己烷后，将其转移至10ml容量瓶中，加适量水，100℃水浴1h，不足水分，混匀，滤过，取滤液2.0ml加入无水乙醇8.0ml，摇匀并放置2min后，离心（3000r/min）10min,弃去上清液，沉淀物用2.0ml流动相溶解后100℃水浴1h即得。分别进行了水解时间的考察。结果见表1。表1水解时间的考察（略）结果1h以上即可完全水解，故选择1h作为水解时间点。精密称定减压干燥48h的D无水葡萄糖对照品21.28mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解

5、并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含D无水葡萄糖2.128mg的溶液，滤过，即得。对系统适应性进行了实验考察。结果见表2。表2系统适应性考察实验结果（略）　　2.3线性关系的考察　　精密吸取对照品溶液5ml于10ml容量瓶中稀释定容，依次用二倍稀释法配制的对照品溶液，照上述色谱条件，精密吸取20μl注入液相色谱仪，连续进样2次，测定。以峰面积为纵坐标（Y），以样品浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。得回归方程Y=32156X+4999.2，相关系数r=0.9998，线性范围为0.25～8.00mg/ml。结果见表3。表3标

6、准曲线绘制实验结果（略）　　2.4精密度实验　　精密吸取对照品溶液取，连续进样6次，测得RSD值为0.6%（n=6），符合实验要求。结果见表5。　　2.5稳定性实验　　取同一样品（批号20050401），按2.2项方法制备，照上述色谱条件，精密吸取20μl注入液相色谱仪，每隔2.5h进样1次，测定供试液12.5h的稳定性。其RSD值为0.2%，符合实验要求。结果见表4。表4稳定性实验结果（略）表5精密度实验结果（略）　　2.6重复性实验　　取同一样品（批号20050401）6份，按2.2项方法制备，分别精密吸取20μl

7、,连续进样2次，测得RSD值为1.5%，符合实验要求。结果见表6。表6重复性实验结果（略）　　2.7加样回收率实验　　取同一样品（批号20050401）9份，加入一定量的对照品，按2.2项方法制备，即得。分别精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，连续进样3次，测定。计算平均加样回收率为100.4%，其RSD值为1.57%，符合实验要求。结果见表7。表7加样回收率实验结果（略）　　2.8药材含量测定　　取不同批号灵芝孢子粉药材约1.0g，精密称定，按2.2项方法依法制备，每次进样20μl测定。结果见表8。表8药材含量测定结

8、果（略）4种不同批号的灵芝孢子粉药材因来源不同其含量有一定的差别，由于对灵芝孢子粉药材多糖含量没有现行的法定标准，生产中应制定内控标准，进行严格控制，其平均含量为114.40mg/g，下浮20%作为内控标准91.52mg/g。　　2.9样品含量测定　　分别取10批（批号20050401，20050402，20050403，2005