高效液相色谱法测定人血浆中依诺沙星含量及药动学研究论文

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1、高效液相色谱法测定人血浆中依诺沙星含量及药动学研究论文孙亚欣丁艳萍何晓静肇丽梅【摘要】目的建立测定人血浆中依诺沙星浓度的高效液相色谱方法。方法血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，以乙腈∶0.05mol/L柠檬酸缓冲液(15∶85，pH3.5)为流动相，经HypersilBDSC18(4.6mm×150mm，5μm)色谱柱分离，345nm波长检测。结果依诺沙星在0.05～5.0μg/ml浓度范围内线性关系良好，低、中、高三个浓度的提取回收率为44.8%～51.1%，日内、日间相对标准差为3.15%～6.61%。结论本方法准

2、确、快速.freelinationofenoxacininhumanplasmabyABSTRACTObjectiveAnHPLCmethodinationofenoxacininhumanserum.MethodsSerumproteinethanol.Theanalysism×150mm,5μm)column,acetonitrile∶0.05mol/Lcitricbuffer(15∶85,pH3.5)asmobilephase,andthedetecting.ResultsThelinearrangeeno

3、xacinlandtherecoveriesethodissuitableforthepharmacokiicstudyofenoxacin.KEYS/MS法［2］、荧光法［3］、微生物法［4］、微透析法［5］，常用HPLC紫外检测［6，7］。本文建立了测定血浆中依诺沙星的高效液相色谱法，该方法简便，快捷，并研究了该药的体内药动学行为，为临床研究提供方法和依据。1仪器与试药HP1100系列高效液相色谱仪(Agilent公司)，GL20GII高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)。依诺沙星对照品(含量99.7%

4、，山东罗欣药业股份有限公司提供)；依诺沙星片(山东新华制药股份有限产品，规格为每片200mg，批号0501084)。甲硝唑对照品(内标物，中国药品生物制品检定所)；乙腈、甲醇为色谱纯；柠檬酸和三乙胺均为分析纯。空白血浆由中国医科大学附属二院输血科提供。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为HypersilBDSC18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相为乙腈∶柠檬酸缓冲液(15∶85，pH3.5)(缓冲盐为每1000ml溶液加三乙胺6ml调至pH3.5)；流速1.0ml/min；检测波长345nm；柱温30

5、℃。2.2血浆样品处理取血浆样品0.5ml，于具塞塑料离心管中，补加50μl甲醇，加入内标(10μg/ml甲硝唑甲醇溶液)50μl，加甲醇1.0ml涡旋混合1min，10000r/min离心10min，移取上清液于另一洁净试管中，55℃氮气吹干上清，200μl甲醇溶解残渣，取20μl上清液进样，记录色谱图。2.3标准曲线取0.5ml空白血浆，依次加入浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0和50.0μg/ml的依诺沙星标准系列的甲醇溶液50μl，配制相当于0.05、0.10、0.25、0.50、1

6、.0、2.5和5.0μg/ml的血浆样品，按“2.2”项下的方法操作，制备标准曲线。以待测物浓度C为横坐标，待测物与内标物的峰面积比(Y)为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，得直线回归方程：Y=0.8612C-0.00047r=0.9977(n=3)2.4方法专属性考察在上述色谱条件下测得空白血浆、空白血浆加入标准品及实测血浆样品的谱图(Fig.1)。在本实验条件下依诺沙星的保留时间约为3.05min，内标甲硝唑保留时间约为4.48min，血浆内源性物质对依诺沙星及甲硝唑无干扰。2.5方法精密度和回收率制备浓

7、度分别为0.1、0.5和2.5μg/ml的依诺沙星标准血浆样品作为质控(QC)样品，按“2.2”项下依法操作，每个浓度6个样本，连续测定3d，以当日的标准曲线计算样品的测得浓度，与配制的浓度对照，求得本法的精密度与准确度。另取相当于0.1、0.5和2.5μg/ml的标准品稀释液，进样20μl，记录峰面积，考察提取回收率。结果见Tab.1。2.6稳定性考察按“2.5”项下方法分别配制低、中、高三个浓度QC样品，每个浓度进行6样本分析经提取，室温放置24h测定，结果RSD＜3%，表明血浆样品室温放置24h稳定。同法配

8、制低、中、高三个浓度的QC样品，经反复三次-20℃冰冻，室温融化后测定样品浓度，结果RSD＜5%，表明血浆样品在冻融条件下稳定。2.7药动学研究A:Blankplasma;B:Plasmaaterial(2.5μg/ml);C:Plasmasample1.5hafterasingledose1:Enoxacin;2:IS经医学伦理委员会批准，选择健康男性志愿者20名，平均