家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究

《家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究作者：朱孝芹，臧亚如，张欢，刘翠哲【摘要】　　目的建立家兔血浆中北豆根碱（RM）的HPLC分析方法，并对RM静注给药在家兔体内药动学过程进行分析研究。方法采用乙腈、二氯甲烷沉淀蛋白质并提取药物，采用HPLC法测定。色谱柱为DiscoveryC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈∶水∶磷酸=16∶84∶0.15(V∶V∶V)；检测波长208nm；柱温为室温；流速0.5ml·min-1；动物实验使用家兔6只，采用静脉注射给药（10mg·kg-1），进行血药浓度测定和药动学参数计算。结果家兔血浆内源物质对药物测定无干扰，在

2、血药浓度0.01～0.10mg·ml-1范围内，浓度对峰面积有良好的线性关系，r=0.9998，提取回收率大于85%，方法回收率在98.3%～100.5%之间；日内、日间精密度RSD均小于10%（n=5）。北豆根碱在家兔体内的血药浓度-时间曲线符合二室模型。结论该法准确、简便、灵敏，可用于北豆根碱在兔体内药动学的研究。【关键词】北豆根总碱；高效液相色谱法；家兔；药动学　　AbstractObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofdauricineinrabbitsplasmaandstudytherelatedpharmaco

3、kiicsinrabbitsafterⅣinjection.MethodsAfterprotEinethane,dauricineinplasmainedonHPLC,andthemobilephasel·min-1.enispermumdauricumDC.的干燥根茎，有清热解毒、祛风止痛作用，其有效部位是生物碱，现已知北豆根中含有近二十种生物碱，总碱含量可达1%以上，其中含量最高的生物碱为RM，其含量约占总生物碱的50%左右［1］。临床及实验均证实RM有良好的抗心律失常作用，且RM延长心肌动作电位时程作用存在剂量依赖性［2］。此外，北豆根碱还有抑制动脉血栓形成［3］、抗氧化［4］

4、、抗肿瘤等［5］作用，具有广泛的应用前景。本实验采用单剂量静脉注射给药的方法，检测北豆根碱在家兔体内的血药浓度，应用3p87软件计算药动学参数。　　1仪器与试药80-2B型台式离心机；802B型台式离心机；LG16色谱工作站，日本）；北豆根饮片，市售，承德产，经鉴定为蝙蝠葛；北豆根碱，对照品，自制（含量99.0%）；无水甲醇、磷酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱为DiscoveryC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈∶水∶磷酸=16∶84∶0.15(V∶V∶V)；检测波长208nm；柱温为室温；流速0.5ml·min-

5、1。　　2.2对照品储备液精密称取北豆根碱对照品(60℃干燥至恒重)5.0mg置25ml容量瓶中，用流动相溶解并定容，作为对照品储备液。　　2.3样品处理方法［6］　　精密吸取家兔血浆1ml，加乙腈0.5ml，二氯甲烷4ml，旋涡混合5min，3000r·min-1离心15min，将有机相转入10ml离心管中，剩余水相再加入二氯甲烷2ml，同法萃取并离心，合并2次萃取液，40℃水浴，N2吹干，残渣用流动相0.2ml定容，充分溶解后，16000r·min-1离心5min，取上清液20μl进样。　　2.4标准曲线的制备取空白血浆1ml置离心管中，加入北豆根碱对照品溶液，使其浓度分别为0.

6、01，0.02，0.03，0.04，0.06，0.08，0.10mg·ml-1，按“样品处理方法”项下操作，以RM峰面积对RM血药浓度进行回归，其回归方程为：Y=1.53×108X+1.8×103，r=0.9998(n=7)，线性范围为0.01～0.1mg·ml-1。　　血浆样品典型色谱图见图1～3。　　2.5回收率测定分别取空白血浆1ml，准确加入北豆根碱对照品溶液，配制高中低3个浓度的血浆样品，按“样品处理方法”项下操作，使其最终浓度为0.01，0.06，0.1mg·ml-1，同时配制相同浓度的北豆根碱对照品水溶液进行测定，每个浓度测定5次。计算提取和方法回收率。结果见表1。表1

7、RM血浆样品回收率壹（略）　　2.6精密度测定将高、中、低浓度的对照品血浆分别进行日内精密度和日间精密度测定。结果见表2。表2RM血浆样品的日内和日间精密度（略）　　2.7家兔血浆样品测定健康家兔6只，雌雄兼用，雌兔无孕，体重(1.6±0.24)kg，于耳缘静脉注射给予北豆根碱，剂量为10mg·kg-1。于给药前和给药后2，5，10，20，30，45，60min及1.5，2，4，6，8，12h在另一侧耳缘静脉采血2.5ml,置肝素化离心管中，3000r·m