脂康调节高脂血症家兔肝脏ldl

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1、脂康调节高脂血症家兔肝脏LDL【摘要】目的通过建立新西兰家兔高脂血症模型,探讨肝脏低密度脂蛋白受体基因水平与高脂血症形成的关系。方法（1）建立高脂血症家兔模型；（2）应用原位杂交方法检测肝脏低密度脂蛋白受体基因水平。结果（1）成功建立高脂血症家兔模型；（2）脂康方剂可有效降低血脂水平，并能有效上调肝脏低密度脂蛋白受体基因水平。结论脂康方剂可激活肝脏细胞膜LDL-R基因表达，使LDL-R的活性增强，从而加速脂蛋白的分解，有效调节血脂水平。【关键词】高脂血症；低密度脂蛋白受体；基因表达StudytheeffectofZhikangonblood-lipidan

2、dloRNAinrabbit【Abstract】ObjectiveTostudytheimmunemechanismofZhikangtocontrolthedevelopmentofhyperlipidemia.Methods(1)TosetuphyperlipidemiamodelsofNeistry).Results(1)Ahyperlipidemiamodelprovetheconditionofatherosclerosis,atthesametime,itcaneffectivelyregulatetheimmunefunctionsonthe

3、levelsofgeneofloia;log/（kg·d）。喂饲8周后，麻醉，心脏取血，用于血脂项目检测。取靠近肝门静脉处的肝脏组织，直径约2cm，用浓度10％福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色，用光镜观察。另取肝脏组织，直径约1cm，用浓度4%的多聚甲醛固定后做LDL-RmRNA（原位杂交）检测。1.3生化指标检测分别于用药前取耳缘静脉血及用药后心脏取血10ml，离心3000r/min，10min，取血清分装，－20℃冰箱保存，血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量测定采用酶法，根据FriedRNA原位杂交检测（

4、LDLRISH原位杂交试剂盒:武汉博士德生物工程有限公司提供）。1.4．1实验步骤(1)将新鲜的肝组织切成不超过4mm的小块，并及时用固定液固定1h。(2)常规脱水、浸蜡、包埋，切片厚度为6～8μm。(3)石蜡切片经常规二甲苯、乙醇脱蜡，滴加H202，室温5～10min以灭活内源性酶。(4)暴露mRNA核酸片段:切片上加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶。37℃12～15min，清洗。(5)后固定:胃蛋白酶消化后在玻片上滴加固定液室温固定10min，清洗3次。(6)预杂交:首先将湿盒准备好，每张切片滴加20μl预杂交液，放入湿盒内，38℃～42℃4h，甩去多余的

5、液体。(7)杂交:在每张玻片上滴加20μl杂交液，将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。放恒温箱杂交过夜。(8)杂交后洗涤。(9)滴加封闭液:放入37℃30min后取出，甩去多余液体，不洗。(10)滴加生物素化鼠抗地高辛:放入37℃60min，PBS洗涤。(11)滴加SABC:放入37℃30min，PBS洗涤。(12)滴加生物素化过氧化物酶:37℃恒温箱中放置30min，PBS洗涤。(13)DAB显色:使用DAB显色试剂盒，滴至玻片上，显色30～50min，充分水洗，苏木素复染，充分水洗，酒精脱水，二甲苯透明，封片。1.4．2原位杂交实验结果判定

6、光学显微镜下观察结果的判定标准:原位杂交结果以细胞浆内或核膜上出现棕黄色颗粒者或斑片为阳性细胞。1.4．3分析方法和统计学处理计算机图像分析，在图像卡IBM586和OlympusBX60显微镜组成的图像处理系统上，测定阳性细胞数:每组每只大鼠各5个高倍视野(10×40)下原位杂交阳性细胞率(%)。1.5结果统计计量资料采用单因素方差分析，F检验，结果用均数和标准差(x±s)表示。用SPSS10.0统计软件对结果进行统计。2实验结果2.1血脂水平变化本实验结果提示脂康高剂量组对高脂血症家兔血清TC、TG、LDL-C水平有显著的降低作用（P<0.01），

7、对HDL-C有显著升高作用（P<0.01）。脂康高剂量与西药辛伐他汀比较，在降低家兔血清TC、TG、LDL-C的作用相近，升高HDL-C作用优于辛伐他汀；与中药血脂康比较，在降低家兔血清TC、LDL-C的作用明显优于血脂康，降低TG水平作用相近，升高HDL-C水平作用优于血脂康。2.2肝脏LDL-RmRNA水平变化肝脏LDL-RmRNA的阳性表达信号可见细胞浆内出现棕黄色颗粒，应用图像分析系统计算各组的阳性表达率，结果见表1。正常对照组与模型对照组、脂康高剂量组及辛伐他汀对照组比较差异有显著性(P<0.01),模型对照组明显低于其他各组，比较差

8、异有显著性(P<0.01),脂康高剂量组明显高于其余各组。表