小鼠混合骨髓移植中脾细胞诱导持久稳定嵌合体的作用

《小鼠混合骨髓移植中脾细胞诱导持久稳定嵌合体的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、小鼠混合骨髓移植中脾细胞诱导持久稳定嵌合体的作用作者：吴迪，张梅，贺鹏程，徐汇，李静，蔡瑞波【关键词】骨髓移植；嵌合体；移植物抗宿主病；脾细胞　　摘要：目的通过小鼠混合骨髓移植模型，将同基因和半相合异基因小鼠骨髓细胞和不同比例脾细胞混合移植给受鼠，探讨诱导持久稳定嵌合体、减轻严重移植物抗宿主病(GVHD)的方法。方法受鼠60Co全身照射，混合输入同基因和半相合异基因供鼠骨髓，同时将两者脾细胞按不同比例混合回输。测定嵌合体形成，观察GVHD表现及病理学改变，监测移植鼠生存率。结果小鼠移植后全部存活超过90d，半相合异基因小鼠

2、脾细胞输注剂量和比例对嵌合体形成的水平和嵌合状态的稳定性有显著影响。结论调整半相合异基因与同基因小鼠脾细胞输注剂量和比例对诱导异体持久植活、避免严重的GVHD的出现具有实际意义。　　关键词：骨髓移植；嵌合体；移植物抗宿主病；脾细胞　　Efficacyofsplenocytesininducingstablelongtermchimerisminmurine　mixedhaploidenticalMHCmatchedbonemarroodel　　ABSTRACT:ObjectiveToexplorethemethodofin

3、ducingstablechimerismurinemixedtransplantmodel.MethodsRecipientmicegiven60Coatchedbonemarroerismoftherecipientmiceetry.ThemanifestationsandhistopathologicalexaminationofGVHDortalityoftherecipientmicefromGVHDicesurvivedover90days.ThedoseofH2haploidenticalmatchedspl

4、enocytesshoerism.ConclusionItiscriticaltoadjustthedoseofH2haploidenticalmatchedandsyngenEIcsplenocytesininducingstablechimerismandavoidingGVHD.　　KEYI1640培养液购买于美国Gibco公司，检测嵌合体所用流式细胞仪(EpicsEliteEps型)为美国Coulter公司产品。　　1.3受鼠BALB/C的预处理照射前5d到移植后2周BALB/C小鼠饮用加有庆大霉素(32×104u

5、/L)和红霉素(250mg/L)的灭菌蒸馏水。在移植前6h，60Co全身照射，总剂量8.5Gy，剂量率为228cGy/min。　　1.4供鼠骨髓与脾细胞的准备断颈处死小鼠后，投入盛有250mL左右的750mL/L乙醇中，浸泡10min。无菌条件下采集BALB/C小鼠和CB6F1小鼠股骨及脾脏。将股骨两端软骨剪去，露出红色的骨髓腔。用5mL无菌注射器吸取含100mL/L小牛血清的RPMI1640液5mL，换装一个4号针头，轻轻插入骨髓腔，反复冲出骨髓腔内的骨髓。PBS洗涤2次,计数并用含100mL/L小牛血清的RPMI164

6、0调整细胞浓度为1×108/mL备用。脾脏经200目筛网研磨成单个细胞悬液,8.5g/LNH4Cl裂解红细胞，PBS洗涤2次，用含100mL/L小牛血清的RPMI1640调整细胞浓度为0.5×108/mL备用。　　1.5骨髓移植及分组将BALB/C受鼠随机分为4组，经尾静脉输注移植物。具体分组如下：A组，15只，每只输注BALB/C小鼠和CB6F1小鼠混合骨髓细胞(1∶1)2×107个及BALB/C小鼠脾细胞0.5×107个；B组，15只，每只输注BALB/C小鼠和CB6F1小鼠混合骨髓细胞(1∶1)2×107及混合脾细胞

7、(1∶1)1×107个；C组，15只，每只输注BALB/C小鼠和CB6F1小鼠混合骨髓细胞(1∶1)2×107及混合脾细胞(1∶2)1.5×107个。对照组，5只，单纯照射，不进行移植。受鼠继续饲养在层流房千级仓中。　　1.6观察指标①嵌合体的检测。分别在移植后＋70d、+150dA、B、C组小鼠随机各取3只眼球取血后，应用流式细胞术分析方法，用PEH2Kb及FITCH2Kd单克隆抗体，来确定受鼠外周血淋巴细胞中半相合异基因供者来源的细胞比例。方法：取肝素抗凝全血50μL置于专用管中，每样品按1μg/106细胞加入PEH2

8、Kb和FITCH2Kd单抗，对照管加入两种无关抗体，充分混匀后置于4℃冰箱避光染色15-30min，加入红细胞裂解液除去红细胞，1000r/min离心5min，移去上清液，PBS洗涤2次，加入PBS500μL重悬成单细胞悬液,上机检测。②大体观察和病理检查。观察受鼠体重变化、有无弓背体位、脱毛和每日大小