伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响论文

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1、伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响论文【摘要】目的:观察丁酸钠对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期及NDRG1蛋白表达的影响.方法:采用0.5mmol/L丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞,用MTT法检测处理不同时间时细胞增殖的变化，采用流式细胞仪检测细胞周期的变化，采用免疫组化方法检测NDRG1蛋白表达的变化.结果:①MTT实验结果显示，丁酸钠作用1～5d时各组吸光度均低于对照组，经统计学处理差异有显著性意义（P0.05）；丁酸钠不同作用时间的细胞增殖抑制率分别为：1d组21.2%，3d组23

2、.5%，5d组25.6%，且随作用时间延长抑制率升高.②细胞周期检测结果为（%）:G1期细胞:对照组57.00±1.10.freelicaheidelberg公司），RPMI1640细胞培养基（GibcoBRL公司）,胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），羊抗人NDRG1多克隆抗体（SantaCruz生物技术公司），丫啶橙(Sigma公司)，CO2孵育箱（美国FormaScientific公司），流式细胞仪（德国PartecPAS公司），Fax250酶标仪（英国Stat公司）.1.2方法1.2.1细胞培

3、养将人食管癌EC9706细胞单层贴壁生长于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中，种植于含盖玻片的六孔板及75cm2培养瓶中.37℃,50mL/LCO2培养箱中培养，隔日换液，取对数生长期细胞进行试验.1.2.2MTT实验取对数生长期的EC9706细胞,调整细胞密度为7.5×107/L,按每孔0.2mL接种于96孔细胞培养板中.设空白对照组和0.5mmoL/L丁酸钠实验组,每组均设10个复孔.实验终止前4h向细胞液中加入MTT20μL,细胞被染色后以二甲亚砜200μL溶解甲瓒颗粒,于酶标仪上

4、测定A492nm.实验重复2次.细胞抑制率=［(A对照-A实验)/A对照］×100%.1.2.3丁酸钠处理及细胞周期检测用RPMI1640培养液将丁酸钠调终浓度为0.5mmol/L,对照组为不含丁酸钠的培养液.取丁酸钠作用1,3,5d的细胞爬片及对照组细胞爬片从六孔板取出后经pH7.4的PBS冲洗，800mL/L丙酮固定30min后用中性树胶黏于载玻片上，4℃保存，用于免疫组化实验.分别取丁酸钠作用1,.freelL/L乙醇1.0mL固定细胞用于细胞周期测定.上机前将细胞离心洗涤制成单细胞悬液,加丫啶橙

5、染色,暗室放置,300目尼龙膜过滤,用流式细胞仪检测细胞周期分布.1.2.4细胞免疫组织化学染色采用SP试剂盒进行免疫组化实验.按说明书步骤进行操作，DAB显色，苏木素复染，光镜观察细胞显色强度.结果判定：在高倍镜下观察免疫组化着色情况，以信号强弱评定NDRG1表达的强弱.统计学处理：采用SPSS11.0软件进行统计学处理，数据均采用x±s表示,检验水准α=0.05.2结果2.1MTT检测不同时间的各组平均吸光度值均低于对照组，其差异有显著性意义（P0.05，表1）；随丁酸钠作用时间延长，其抑制率升高.

6、表1丁酸钠对人食管癌细胞EC9706的增殖抑制作用确良（略）2.2丁酸钠对食管癌细胞细胞周期的影响实验组G1期细胞比例与对照组比较明显增高,而S,M期细胞比例减少，经统计学处理，差异有显著性意义（P0.01,表2）.表2丁酸钠对食管癌EC9706细胞周期的影响（略）2.3丁酸钠对食管癌细胞NDRG1蛋白表达的影响免疫组化染色结果显示，在作用1～5d时，细胞胞质黄色着色较对照组明显加深，且随作用时间延长而增强（图1）.3讨论食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤，食管癌的治疗方法除手术治疗、放疗等方法外，还有许

7、多新的治疗方法，如基因治疗、免疫治疗、抗血管生成治疗、诱导分化治疗等［6］.其中诱导分化治疗是肿瘤化学治疗的一个新领域.诱导分化是指恶性肿瘤在体内外分化诱导剂存在下，细胞恶性行为降低，恶性表性发生改变，形态学趋于正常，呈现出向良性或趋向良性细胞分化的现象.利用分化诱导剂可使肿瘤细胞部分或全部恢复分化潜能，转变为正常细胞或导致细胞凋亡，从而达到治疗肿瘤的目的.我们的结果表明，丁酸钠作用1～5d后细胞增殖的抑制率由17.4%增加到23.8%，表明丁酸钠可抑制食管癌细胞增殖，实验中增高丁酸钠浓度至1mmol/

8、L2～3d（结果未列出），可见培养的细胞死亡显著增多，说明其抑制率随丁酸钠浓度增加而升高；其增殖抑制作用与丁酸钠使食管癌EC9706细胞细胞周期发生变化有关，丁酸钠可使G1期细胞增加；S期细胞比例、M期细胞比例显著降低，从而使细胞增殖周期延长，导致细胞增殖减慢.丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞后，NDRG1的蛋白表达水平显著升高，而升高NDRG1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖，促进其分化［4-5］，因此丁酸钠对食管癌细胞的增殖抑制作用可能