高效液相色谱法测定益气养阴降糖丸中葛根素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定益气养阴降糖丸中葛根素的含量论文颜素琴，宋晓琳，李祥勇【摘要】目的建立益气养阴降糖丸中葛根素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）法，检测波长：250nm，流动相：甲醇0.1%枸橼酸溶液(25∶75),流速：1.0ml/min。结果葛根素浓度在10.0～90.0μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9996），加样回收率为99.5%（n=3），RSD为1.2%。结论此方法操作简便，结果准确.freelinationofPuerarinContentinJiangta

2、ngPillforInvigoratingQiNourishingYinbyHPLCMethodAbstract：ObjectiveTodevelopamethodtodeterminethecontentofpuerarininJiangtangpillforinvigoratingQi,nourishingYin.MethodsHighPerformanceLiquidChromatography(HPLC),.freel,themobilephaseconsistsofmethanoland

3、0.1%citricacid(25∶75),atflol/min.ResultsThelinearrangeofpuerarinl(r=0.9996).Therecoveryofsampleethodissimpleaccurate,andcanbeusedforthedeterminationofpuerarincontentinJiangtangpillforinvigoratingQi,nourishingYin.Keyethod;Puerarin;Jiangtangpillforinvig

4、oratingQi益气养阴降糖丸是我院研制的治疗糖尿病的中成药，由黄芪、葛根、桑寄生、生地、生水蛭等十多味中药组成，具有益气养阴、健脾运津、除烦止渴、补益肝肾的作用，临床疗效良好。为了更有效地控制制剂的质量，我们对其主要成分葛根素进行了含量测定，以期为该制剂的质量控制提供检测方法。1仪器与试药日本岛津LC10ATVP高效液相色谱仪，SPD10AVP紫外检测器，赛多利斯BP211D电子天平，葛根素对照品（中国药品生物制品检定所01250107），甲醇为色谱纯，益气养阴降糖丸（自制）。2方法与

5、结果2.1色谱条件色谱柱为日本岛津ShimpeckVPODS柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇0.1%枸橼酸溶液(25∶75),流速1.0ml/min，检测波长为250nm，柱温为室温。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品25mg（60℃五氧化二磷减压干燥4h）置50ml量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀即得。2.2.2供试品溶液的制备精密称取供试品4.0g，研细，置50ml量瓶中，用甲醇溶解，超声处理30min，并稀释至刻度，离心，取上清液，

6、用0.45μm的微孔滤膜滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。2.3标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.00，3.00，5.00，7.00，9.00ml分别置于50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制得标准溶液系列，取10μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归分析，回归方程为：A=50939138C-10496，r=0.9996，线性范围10.0～90.0μg/ml，最低检测限为100μg/ml（S/N≥3）。

7、2.4精密度实验在上述色谱条件下，取50μg/ml的对照品溶液，重复进样6次，峰面积的RSD值为0.62%。结果表明仪器的精密度较好。2.5重复性实验精密称取同一批号的样品5份，按照样品测定方法操作，测定含量，计算RSD为1.6%。2.6回收率实验精密称取已知葛根素含量的样品3份，每份中分别加入精密称定的葛根素对照品，混匀，照供试品的测定方法，计算平均回收率为99.5%（n=3），RSD为1.2%。2.7样品的含量测定取3个批号的样品，制成供试品溶液，分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl注

8、入液相色谱仪，依法测定，以外标法计算含量。结果见表1。表1益气养阴降糖丸中葛根素的含量（略）3讨论3.1流动相的选择本实验比较了甲醇-水，乙醇-水，甲醇-酸液系统对样品中葛根素保留时间、分离度的影响，结果发现采用甲醇-0.1%枸椽酸溶液（25∶75）的流动相色谱效果良好。3.2提取方法的比较对于葛根素的提取，以往的文献有采用索氏提取器提取的［1］，有采用水浴加热回流提取的［2］，本实验采用甲醇为溶媒，采取超声振摇提取法提取，效果良好，方便快捷。方法学验证显示，本实验所建立的方法简便