注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立论文

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1、注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立论文.freell，批号051109，050210，湛江安度斯生物有限公司)；细菌内毒素检查用水(批号200050208，含量≤0.03EU/ml，湛江海洋生物制品检定厂)；注射用炎琥宁(供试品，规格每支0.2g，批号051209、0501018、050926，哈尔滨三联药业有限公司)。2方法与结果2.1鲎试剂灵敏度(λ)复核按细菌内毒素检查法［２］，用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25λ4个浓度进行实验。结果表明，灵敏度为0.125EU/ml的鲎

2、试剂符合规定。见表1。将表1数据代入公式λc=lg-1∑xiniλc=0.125。表1鲎试剂灵敏度复核实验结果TAL内毒素浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125灵敏度(λc)051109++--0.125050210++--0.1252.2注射用炎琥宁细菌内毒素限值(L)的确定L=K/M，式中K为规定的给药途径，人用每千克体重每1h可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K=5.0EU/kg·h；M为人用每千克体重每1h给药的最大剂量，经计算，供试品M=1.0ml/kg·h，因此细菌内毒素理论

3、限值为：L=K/M=5/1.0=5EU/ml。2.3供试品的最大有效稀释倍数(MVD)选用灵敏度为0.125EU/ml鲎试剂时，MVD=Lλb=50.125=40倍。2.4供试品干扰初筛试验用BET水将注射用炎琥宁(批号051209)分别稀释成原液、1→10、1→20、1→40系列浓度，以各稀释浓度供试品将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25λb4个浓度的内毒素溶液，与鲎试剂混合进行抑制/增强试验，结果表明，供试品在较高浓度时对鲎试剂有干扰作用，之外，其直接毒性作用可刺激心血管、肝脏等脏器与功能

4、，是导致肝细胞局灶或弥漫性坏死的主要原因。肝细胞可出现局灶或弥漫性坏死，门脉周围纤维化。在供试品至少1→40稀释后则对鲎试剂无干扰作用，见表2。2.5供试品干扰试验由于干扰初筛试验结果，选择灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂(批号051209)，并用BET水将3批供试品1→40稀释后进行干扰实验。其中用BET水将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml作内毒素水溶液系列；再用BET水和3批1→40的供试品稀释液将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml作内毒素供试品溶液

5、系列；再用BET水和3批1→40的供试品稀释液各做2支阴性对照。结果表明λs、λt都在0.5λ～2λ范围内，表明供试品经1→40稀释，使用灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂试验，可以排除干扰，进一步验证了初筛试验的结果，见表3。表2供试品(批号021209)干扰初筛结果鲎试剂批号供试品稀释倍数内毒素系列浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125供试品阴性对照051109原液------------------1：10------------------1：20---------------

6、---1：40+++++++++---------050210原液------------------1：10------------------1：20+-----------------1：40++++++++++--------表3供试品(1→40)干扰试验结果内毒素浓度(EU/ml)内毒素水溶液内毒素供试品溶液(1→40)0512090510180509260.25++++++++++++++++0.125++++++++++++++++0.06----+++++---++--0.03--------

7、--------水溶液对照--供试品对照------终点(EU/ml)λs=0.125λt=0.06λt=0.105λt=0.092.6细菌内毒素检查依照上述方法，将3批供试品1→40稀释，用2批0.125EU/ml鲎试剂进行细菌内毒素检查，结果均符合中国药典对其有效性的规定，见表4。表4样品稀释溶液(1→40)的细菌内毒素检测结果鲎试剂批号样品批号供试品(1→40)溶液阴性对照供试品阳性阳性对照051109051209---++050218---++050126---++050210051209---++0

8、50218---++050126---++3小结注射用炎琥宁为中药注射液，为大分子物质。在预试验中，供试品的原液、1→10、1→20稀释液对标示灵敏度为0.5EU/ml和0.25EU/ml的鲎试剂有抑制作用，故选择标示灵敏度为0.125EU/ml或灵敏度更小的鲎试剂。由本试验可知，只需将供试品至少1→40稀释，对鲎试剂的抑制作用即消失。不同鲎试剂对供试品的反应有差异。本实验采用两种不同批号的鲎试剂同