幽门螺杆菌对大环内酯类抗生素的耐药机制及耐药性检测

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1、幽门螺杆菌对大环内酯类抗生素的耐药机制及耐药性检测【关键词】,幽门螺杆菌；,,大环内酯类抗生素；,,耐药机制；,,耐药性检测　　摘要：幽门螺杆菌是慢性活动性胃炎、消化性溃疡的主要病因，近年来幽门螺杆菌对大环内酯类抗生素的耐药率不断上升。关于幽门螺杆菌耐药机制的问题，目前还存在许多争议。随着检测技术的不断进步，现已发展了多种检测幽门螺杆菌耐药的分子生物学方法，本文就幽门螺杆菌对大环内酯类抗生素的耐药机制及耐药性检测方面作一综述。　　关键词：幽门螺杆菌；大环内酯类抗生素；耐药机制；耐药性检测　　　ThemechanismanddetectionofHelicobacterpyloriresi

2、stancetomacrolides　　ABSTRACTHelicobacterpylori(Hp)isthemainofpathogenofchronicactivegastritisandpepticulcer(PU).RecentlyHpresistancetomacrolideshasgraduallyincreased,echanismofHp,therehasbeenmanydebates.ALT)淋巴瘤的发生密切相关。目前以大环内酯类抗生素尤其是克拉霉素为主的三联疗法成为根除Hp感染的主要方案。近年来，随着大环内酯类抗生素在临床上的广泛使用，导致Hp耐药菌株逐渐增多，给相关

3、疾病的治疗带来诸多困难。克拉霉素对Hp敏感株的根除率大约为90%，对耐药菌株的根除率仅在0～50%之间。故阐明Hp对大环内酯类抗生素的耐药机制，以及早期检测Hp对抗生素的敏感性，对根除Hp感染治疗具有非常重要的临床意义。　　1Hp对大环内酯类抗生素的耐药率变迁　　大环内酯类药物(以克拉霉素为代表)具有对酸稳定和在胃黏膜中浓度高、口服后生物利用率好和不良反应小等优点，是根除Hp治疗方案的主要抗菌药物，在临床广泛应用。20世纪80年代中期Hp对克拉霉素的耐药率几乎为0，其临床根除Hp的疗效良好，含克拉霉素的三联疗法与不含克拉霉素的三联疗法相比，Hp根除率提高10%～20%。但是随着使用时间的

4、延长，Hp对克拉霉素的耐药率逐年升高，影响了克拉霉素的抗菌效果。目前许多国家和地区的耐药率发生了巨大的变化：1998年Glupczynski［1］对欧洲进行的多中心调查显示，Hp对克拉霉素的耐药率仅为99%；在亚洲，Tangmankongeimmunoassay，DEiA)此方法又分为酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶免疫测定(EIA)两种。ELISA是指将生物素酰基化的探针加入抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)包被的微量滴定板上，再加入变性的DNA，然后用标记的抗双链DNA的单克隆抗体进行检测；EIA的基本原理为通过相应底物被酶解后的显色反应进行判断，用酶标检测仪测定波长为

5、450nm的光密度值(A450)，根据A450值绘制ROC曲线进行分析。Marais［23］和Pina［27］分别通过此技术进一步证实了A2143C、A2143G和A2144G等三种形式的突变与克拉霉素耐药之间的关系。(4)同源双链优先形成试验(preferentialhomoduplexformationassay，PHFA)PHFA是根据同源双链较异源双链优先形成的原理，将双标记的双链DNA探针［一股标记生物素，另一条标记二硝基苯酚(DNP)］与未标记的双链DNA样品进行混合、变性，当标记的DNA的序列与未标记的DNA序列相同时，同源双链之间可以进行杂交。由于未标记的DNA分子的稀释

6、，双标记的双链DNA的比例将会减少。当两者的DNA序列不相同甚至仅一个碱基存在差异时，同源双链优先形成，双标记双链DNA分子的比例不会减少。在双标记双链DNA中，一条标有生物素的DNA链可通过生物素与亲和素之间的亲和力连接于亲和素包被的微量滴定板上，当加入碱性磷酸酶标记的抗DNP抗体和硝基苯酚磷酸盐(pNPP)，标有DNP的DNA链就可以通过与酶标DNP抗体和pNPP结合发生的显色反应进行检测［28］。因此，通过制备针对Hp23SrRNA基因特定位点突变的双标记双链DNA探针，可以检测耐药的突变基因，该方法的敏感性可达到95%以上。与PCRRFLP法比较，PHFA可以在一个微量滴定板上同

7、时检测多个样品；通过制备特异探针可以检测各种突变，并且能准确的检测混合感染。由于突变菌株和野生型菌株可能定植于胃的特定部位，所以从胃液提取DNA检测比从单一胃活检组织块中提取DNA检测耐药更准确，而PHFA正是第一种将胃液作为标本的检测方法。(5)PCR线性探针分析(PCRLineprobeassay，PCRLiPA)PCRLiPA是指利用生物素化的引物扩增Hp23SrRNA基因片断，扩增产物经变性后与平行固定在硝酸纤维素薄膜上的特