超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究论文

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1、超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究论文吕杏放朱文斌杨倬荣周杨黄春瑜彭新生【摘要】目的：探讨夏枯草中总三萜类成分的提取工艺。方法：采用正交试验设计方案优化夏枯草中总三萜类成分的超声提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取温度65℃，85％乙醇，超声30min，10倍溶剂用量，超声提取3次。结论：超声提取既简便又高产，节能且环保。【关键词】超声提取总三萜类夏枯草熊果酸夏枯草是唇形科植物夏枯草PrunellavulgarisLinn．的干燥果穗或全草，别名夏至草、夏枯头。在我国主产于江苏、浙江、安徽和济南等地，主要化学成分为三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类、糖类和挥发油类等［1］.freell

2、）超声溶解，过滤，加活性炭脱色并于70℃水浴15min，趁热过滤，加无水乙醇定容至25ml,取10ml样品溶液离心（4000r/min,20min）。离心后取上层澄清液5ml于25ml容量瓶，加无水乙醇定容至刻度，作为供试液备用。2.2测量方法的研究2.2.1对照品溶液的制备准确称取熊果酸标准品20.00mg至容量瓶中，用无水乙醇配成浓度为80.00g／ml的对照品溶液。2.2.2选择显色条件采用L9（34）正交表设计正交试验：0.30ml、0.40ml、0.50ml的5％香草醛-冰醋酸（A）；0.80ml、1.00ml、1.20ml的高氯酸（B）；50.0℃、60.0℃、70.0

3、℃的水浴温度（C）；10.0min、15.0min、20.0min水浴时间（D）。用对照品溶液显色，以吸收度数值为检测指标，得出最佳显色条件为：5.0％香草醛-冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸1.00ml，60℃水浴10min。2.2.3最大吸收波长的选择精密吸取1.00ml熊果酸对照品溶液，用最佳显色条件显色。对显色体系在500nm～600nm波长范围内扫描，结果表明：在546nm处显示最大吸收，且空白无干扰，故选546nm为测定波长。2.3方法学考察［6，7］及含量测定2.3.1线性关系考察精密吸取熊果酸对照品溶液（80.00g／ml）0.50、0.60、0.70、0.80、0.

4、90、1.00、1.10ml置带塞刻度试管中，100℃水浴挥干溶剂，加5.0％香草醛-冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸1.00ml，60℃水浴10min，冰浴冷却，加冰醋酸5.00ml，摇匀，在546nm处测定吸收值，以熊果酸的微克数为横坐标，吸收度测定值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析。2.3.2稳定性考察精密吸取熊果酸对照品溶液0.60ml，浓度为80.00g／ml。在显色冰浴冷却后开始计时，于20min～80min分钟内测定。2.3.3重现性考察精确称取干燥至恒重的夏枯草粗粉5份，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度。2.3.4含

5、量测定精确称取干燥至恒重的夏枯草粗粉3份，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度。以吸收度值为考察指标，计算药材中总三萜类成分的含量。2.3.5回收率试验分别精密吸取熊果酸对照品溶液（80.00g／ml）置5支带塞刻度试管中，各0.50ml，各精确加入称取的干燥至恒重夏枯草粗粉，然后按2.1.3项下方法平行操作，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度，按标准曲线进行测定分析。2.4结果2.4.1线性关系考察结果回归方程为：y＝0.0058x＋0.0099，R2＝0.9936，在39.33g～86.22g范围内呈良好线性关系。2.4.2稳定

6、性考察结果稳定性考察结果为在显色后30至60min内稳定，见表2。表2稳定性考察表（略）2.4.3重现性考察结果重现性考察得样品平均浓度为56.15g／ml，RSD＝1.37%（n＝5），重现性良好。见表3。表3重现性考察表（略）2.4.4总三萜成分得率与数据分析正交试验结果数据分析，见表4、5。表4正交试验结果与分析（略）表5正交试验结果的方差分析（略）注：*P0.05。由表5分析可知，夏枯草中总三萜类成分最佳提取工艺为：A3B3C2D3。对夏枯草中总三萜类物质含量影响因素主次顺序为：BACD，即超声温度65℃，85％乙醇，超声30min，10倍溶剂用量。2.4.5验证实验以A3

7、B3C2D3最佳工艺进行3次重复实验，测得夏枯草中总三萜类成分平均含量为3.497％。RSD＝0.824％，见表6。表6夏枯草总三萜类物质含量测定（略）2.4.6回收率试验结果用最佳提取工艺即提取温度65℃，85％乙醇，超声30min，10倍溶剂用量提取出来的供试品溶液进行回收率试验，得出平均回收率＝98.65％，RSD＝1.73％。见表7。表7回收率试验（略）3讨论在预试验中发现，提取3次总三萜类成分含量为65.71μg，提取2次总三萜类成分含量为49.67μg。提