超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究

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1、超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究作者：吕杏放朱文斌杨倬荣周杨黄春瑜彭新生【摘要】　　目的：探讨夏枯草中总三萜类成分的提取工艺。方法：采用正交试验设计方案优化夏枯草中总三萜类成分的超声提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取温度65℃，85％乙醇，超声30min，10倍溶剂用量，超声提取3次。结论：超声提取既简便又高产，节能且环保。【关键词】超声提取总三萜类夏枯草熊果酸夏枯草是唇形科植物夏枯草PrunellavulgarisLinn．的干燥果穗或全草，别名夏至草、夏枯头。在我国主产于江苏、浙江、安徽和济南等地，主要化学成

2、分为三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类、糖类和挥发油类等［1］，具有清肝、明目、散结、消肿、止痛之功效，临床用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎等疾病［2］。夏枯草属植物中含有多种三萜类成分,主要为齐墩果烷型、乌苏烷型和羽扇豆烷型三萜。其药理活性成分熊果酸、齐墩果酸等三萜类化合物具有镇静、抗炎、抗菌、抗高血压、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应［3］。近年来研究发现，三萜类中的熊果酸具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用，极有可能成为低毒高效的新型抗

3、癌药物［4］；齐墩果酸具有保肝、免疫作用［5］。本实验采用正交试验设计，以夏枯草中总三萜类成分的含量为评价指标，考察乙醇为溶剂用超声提取的最佳工艺条件。1仪器与试药　　KQ200DB型数控超声波清洗器；UV-1800紫外-可见分光光度仪；TGL-18G高速台式离心机；WK-1000A高速药物粉碎机。　　夏枯草购于广东东莞国药集团有限公司，经苟占平副教授鉴定为夏枯草属植物夏枯草(PrunellavulgarisLinn)。　　熊果酸标准品购于中国药品生物制品检定所。活性炭，其余试剂均为。实验方法.1夏枯草超声提取正交

4、试验设计方案.因素水平试验选择以下4个因素：乙醇浓度、超声温度、提取时间、溶剂用量作为考察对象，每个因素取3个水平，以提取物中总三萜类成分含量为评价指标，采用L9正交表进行正交试验设计。表1因素水平表.夏枯草预处理取干燥的夏枯草若干，粉碎成粗粉，干燥。.供试品溶液制备准确称取9份夏枯草粉末，每份，分别置圆底烧瓶中，加入相应浓度和体积的乙醇，置超声器中提取，趁热抽滤；滤渣再次加入相应浓度和体积的乙醇，置超声器中提取；共超声提取3次，每次操作的条件和步骤一致，合并3次滤液，置于旋转回流蒸发仪中，60℃水浴浓缩蒸干所有溶

5、剂。样品浓缩后，加无水乙醇超声溶解，过滤，加活性炭脱色并于70℃水浴15min，趁热过滤，加无水乙醇定容至25ml,取10ml样品溶液离心。离心后取上层澄清液5ml于25ml容量瓶，加无水乙醇定容至刻度，作为供试液备用。.2测量方法的研究.对照品溶液的制备准确称取熊果酸标准品至容量瓶中，用无水乙醇配成浓度为g／ml的对照品溶液。.选择显色条件采用L9正交表设计正交试验：ml、ml、ml的5％香草醛-冰醋酸；ml、ml、ml的高氯酸；℃、℃、℃的水浴温度；min、min、min水浴时间。用对照品溶液显色，以吸收度数值

6、为检测指标，得出最佳显色条件为：％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，60℃水浴10min。.最大吸收波长的选择精密吸取熊果酸对照品溶液，用最佳显色条件显色。对显色体系在500nm～600nm波长范围内扫描，结果表明：在546nm处显示最大吸收，且空白无干扰，故选546nm为测定波长。.3方法学考察［6，7］及含量测定.线性关系考察精密吸取熊果酸对照品溶液、、、、、、置带塞刻度试管中，100℃水浴挥干溶剂，加％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，60℃水浴10min，冰浴冷却，加冰醋酸，摇匀，在546nm处测定吸收值，以熊果酸的微

7、克数为横坐标，吸收度测定值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析。.稳定性考察精密吸取熊果酸对照品溶液ml，浓度为g／ml。在显色冰浴冷却后开始计时，于20min～80min分钟内测定。.重现性考察精确称取干燥至恒重的夏枯草粗粉5份，按项下方法制备供试品溶液，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度。.含量测定精确称取干燥至恒重的夏枯草粗粉3份，按项下方法制备供试品溶液，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度。以吸收度值为考察指标，计算药材中总三萜类成分的含量。.回收率试验分别精密吸取熊果酸对照品溶液置5支带

8、塞刻度试管中，各，各精确加入称取的干燥至恒重夏枯草粗粉，然后按项下方法平行操作，按最佳显色条件显色，于稳定范围内测定吸收度，按标准曲线进行测定分析。.4结果.线性关系考察结果　　回归方程为：y＝＋，R2＝，在～范围内呈良好线性关系。.稳定性考察结果　　稳定性考察结果为在显色后30至60min内稳定，见表2。表2稳定性考察表.重现性考察结果　　重现性考察得样品