珠子参皂苷对人早幼粒白血病hl

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1、珠子参皂苷对人早幼粒白血病HL作者：陈涛，胡卫巩仔鹏，翟文海【摘要】目的探讨珠子参皂苷对HL-60细胞增殖抑制和诱导分化作用及其机制。方法MTT比色法测定细胞增殖抑制作用;细胞涂片观察细胞形态学改变;硝基四氮唑蓝(NBT)试验测定细胞还原能力;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果72h后，最低、低、中、高浓度珠子参皂苷组的细胞增殖抑制率分别为51.86%，42.84%，49.13%，66.40%;细胞形态学观察发现珠子参皂苷组67.1%细胞分化成熟;NBT还原能力明显增强;细胞被阻滞在G0/G1期。结论珠子参皂苷对HL-60细胞有一定的

2、增殖抑制和诱导分化作用，其作用机理可能与阻止细胞于G0/G1期有关。【关键词】珠子参;皂苷;HL-60;分化珠子参Panaxjaplcusvarmajor又名扣子七，为五加科植物珠子参PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y..Feng或羽叶三七PanaxjaponicusC.A.Mey.var.bipinnati-fidus(Seem)C.Y..Feng的干燥根茎，主要分布于东喜马拉雅至我国西部山区[1]。它的根茎为药材珠子参，具活血散瘀、补血止血、消肿止痛之功。目前已从珠子参各种属珠子参根茎及

3、叶中共分离出25个皂苷，多数为三萜皂苷[2]。从结构上分析，珠子参皂苷极可能具有诱导肿瘤细胞分化的作用。但到目前为止，珠子参皂苷用于抗肿瘤方面的研究还非常少。本文以人早幼粒白血病HL-60细胞株为对象，用体外细胞培养的方法，初步探讨了珠子参皂苷抗癌及诱导肿瘤细胞分化的作用。　　1材料　　1.1细胞株人早幼粒白血病HL-60细胞株，购自上海中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。　　1.2药品与试剂珠子参，产于湖北省神农架林区，经宜昌市药品检验所鉴定。珠子参总皂苷提取方法见参考　　3结果　　3.1细胞毒作用结果见表1，可以看出，与阴性对照组相

4、比较，药物作用24，48，72h后，珠子参皂苷各不同浓度组和阳性对照组的OD值均明显小于阴性对照组，且均有显著性差异(P<0.01)，说明珠子参皂苷有抑制HL-60细胞生长的作用。而且珠子参皂苷对HL-60细胞的生长抑制作用随着药物作用时间的延长，效果也随之增强。由于珠子参皂苷对HL-60细胞抑制作用最低浓度组作用虽比高浓度组弱，但比低、中浓度组强，考虑到药物浓度过高，对细胞有杀伤作用，以及有的中药有双向调节作用，所以选择珠子参皂苷最低浓度(100μg/ml)作为珠子参皂苷浓度，以后所提到的珠子参皂苷组均为珠子参皂苷最低浓度组。表1

5、不同药物在不同时间对HL-60细胞生长的影响与阴性对照组比较，*P<0.01;n=5　　3.2细胞形态分级本次实验显示，在药物作用72h后，光镜下阴性对照组中的HL-60细胞呈原始未分化状态，体积大而圆，胞浆较少，含有少量嗜天青颗粒，胞核大、圆形或椭圆形，染色质细，核仁大而圆，常为2～3个，而阳性对照组和珠子参皂苷组的大部分细胞分化为中、晚幼粒细胞，胞体变小，呈圆形或椭圆形，胞核小，核仁减少或消失，核染色质变粗，核/浆比例下降，胞浆中出现特异性颗粒，部分呈杆状核和分叶核细胞，见图1～5。各组细胞形态分化率见表2，从此表可以看出，与阴

6、性对照组相比，阳性对照组和珠子参皂苷组的早幼粒细胞比值明显下降(P<0.01);而中幼粒细胞和晚粒细胞比例都明显增高(P<0.01)，且出现杆状核或分叶核细胞，说明HL-60细胞在珠子参皂苷作用下从形态学方面向成熟细胞方向的改变。表2不同药物对HL-60细胞形态学影响　　3.3NBT细胞还原能力由表3可以看出，药物作用72h后，阳性对照组NBT阳性细胞占73.9%，珠子参皂苷组NBT阳性细胞占62.3%，与阴性对照组(7.1%)相比较，阳性对照组和珠子参皂苷组NBT阳性细胞均明显增多(P<0.01)。说明HL-60细胞在

7、珠子参皂苷的作用下，在功能和生化学变化方面向成熟细胞方向的改变。表3不同药物对HL-60细胞NBT还原能力的影响　　3.4FCM周期分析流式细胞仪检测结果表明，在药物作用72h后，阳性对照组和珠子参皂苷组的G0/G1期细胞都增多(61.78%，48.62%)，S期细胞都减少(18.42%,30.38%)，与阴性对照组(39.64%，37.52%)相比有显著性差异(P<0.01)。说明珠子参皂苷和ATRA都可使HL-60细胞阻断在G0/G1期，使DNA合成受抑制，从而干扰了HL-60细胞在细胞周期中的进程。结果见表4。而且从增殖指数的

8、变化可以看出，珠子参皂苷可以抑制细胞增殖。DNA含量分布图见图6。表4不同药物对HL-60细胞周期影响　　4讨论　　HL-60细胞最大特点是在分化诱导剂作用下可向粒细胞系统或巨噬细胞系统两个方